细胞产物分析技术-2细胞产物提取技术-2011.ppt

2 细胞产物提取技术 溶剂分子通过扩散、渗透或吸收等作用进入样品中， 然后通过样品内外浓度差异产生渗透和扩散作用将样品中的有机物提取出来。溶剂分子不断进出样品 直至样品和溶剂中的有机物浓度达到平衡，这个过程称为提取。 对于气态样品，一般是将气体通过溶剂，称为吸收；或将气体通过固体吸附剂，称为吸附； 固体样品则是直接放置在溶剂中，溶剂渗透到固体样品而将有机物提取出来，通称提取； 而液态样品一般是用溶剂通过外力混合将有机物从液态样品转移到溶剂中，一般称为萃取。 细胞产物的提取是以细胞中目的物质为研究对象进行的提取过程。经过提取所得的样品通常是混合物，成分较为复杂。 两个方面：适当的方法或手段、合适的溶剂 常用溶剂：石油醚、己烷、庚烷、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、乙腈、 水、甲酰胺 常用溶剂 溶剂极性是指溶剂对电荷的亲和能力，常用介电常数来比较溶剂的极性大小。 介电常数又称电容率或相对电容率，表征电介质或绝缘材料电性能的一个重要数据，常用ε表示。它是指在同一电容器中用同一物质为电介质和真空时的电容的比值，表示电介质在电场中贮存静电能的相对能力。介电常数愈小绝缘性愈好。溶剂的极性增加，介电常数增大。 常用溶剂 水——最常用的溶剂 介电常数达80.4，是强极性溶剂，绝大多数有机溶剂的介电常数均比水小。 强极性溶剂，价廉、易得、使用安全；穿透能力很强，很容易进入样品中将亲水的强极性物质提取出来。常见的无机盐、单和低聚糖、鞣质、氨基酸、蛋白质及多肽、黏液质、果胶、有机酸、酚类、生物碱的盐类和苷类都能用水提取。 常用溶剂 水——最常用的溶剂 可用稀酸或碱水提取样品。如酸性水可以使生物碱与酸作用成盐增加溶解度，而更容易提出。碱性水可使有机酸、黄酮、蒽酯和内酯及许多酚类有机物从样品中提取出来。 水常常会使细胞中的有机物发生变化，如水解和酶解。水提取液不易保存，易发生霉变，环境样品的水提取液易发生分解或聚合反应。 常用溶剂 甲醇、乙醇和丙酮等亲水性有机溶剂 穿透能力也很强，可将大多数有机物质从样品中提取出来，而样品中的无机盐、蛋白质、淀粉、果胶和黏液质等物质大多数不被提取出来。 亲水性的醇类提取样品所需时间短，还能使蛋白质凝固而破坏酶的活力，保证提取出的有机物不被水解或酶解。 甲醇的极性高于乙醇，提取效率优于乙醇。但甲醇沸点低，毒性较大。乙醇是最常用的有机溶剂，具有低毒、价廉、沸点适中、便于回收利用等特点。 常用溶剂 亲脂性的石油醚、苯和氯仿等有机溶剂 选择性强，一般不能或不易提取出样品中的强极性有机物，对弱极性有机物的提取也与所用的溶剂不同而有显著的差异 可以针对性地从样品中提取出相应的有机物，所得有机物纯度较高。 对细胞中的油脂类成分具选择性提取功能。根据提取目的不同,常使用石油醚或乙醚来萃取这类成分。 常用溶剂 亲脂性的石油醚、苯和氯仿等有机溶剂 植物中所含的次生代谢产物成分较为简单或某一成分含量较高时，可根据其极性大小或溶解性能，选择一种适当的溶剂把所需的成分提取出来，而杂质留在植物残渣里。 挥发性大，易燃，有毒性，价格较高，操作和设备要求高，穿透性很弱，需要长时间反复提取才行。 大量有机物的提取，一般不使用亲脂性溶剂提取方法。 常用溶剂 常用溶剂 常用溶剂——溶剂选择原则 相似相溶原理：即极性化合物易溶于极性溶剂，非极性化合物易溶于非极性溶剂同类分子或官能团相似的彼此互溶。分子结构中极性基团的多少及取代位置决定了其在不同溶剂中的溶解性。 惰性溶剂原则 用溶剂从生物体和环境样品中提取有机物 选用的溶剂最好有针对性，选用化学惰性的溶剂进行提取。 化学惰性是指溶剂本身不能和有机物发生化学反应而导致有机物结构变化。 常用溶剂——溶剂选择原则 混合溶剂提取原则 一种溶剂不能进行有效提取时，可将多种溶剂按比例混合，用混合溶剂提取。 ※溶剂混合存在一个混溶问题，各溶剂间的溶解度决定它们的相互混溶比例。在使用混合溶剂提取样品时，不能用无法均匀混合的溶剂去提取样品。 溶剂的混合，一般会出现完全不能混合、有限比例混合和任意比例混合三种情况。三种混合情况的形成主要是取决于溶剂间的极性，强极性和弱极性溶剂一般不易混合，亲脂性溶剂和亲水性溶剂也不易混合。只有极性相当的溶剂可以很好的混合。 常用溶剂——溶剂选择原则 低沸点易挥发原则 溶剂提取出样品后，要进行浓缩处理。以免为下一步的溶剂去除增加困难，应尽可能的选用低沸点易挥发的溶剂。 水的沸点是100℃，加上氢键的影响，挥发性不好，除去大量水比有机溶剂要困难得多。 常用溶剂——溶剂选择原则 对于基本信息一无所知的样品常常用极性不同的溶剂进行梯度提取 常用溶剂——溶剂毒性 危害的