奥曲肽抑制人卵巢癌细胞增殖的研究.doc

　　奥曲肽抑制人卵巢癌细胞增殖的研究 【关键词】 奥曲肽; 卵巢癌; 血管内皮生长因子 　　[Abstract] Objective: To study the effect of octreotide on the human ovarian cancer cell line SKOV3. Methods: Metastatic model simulating human ovarian cancer plantation of the ovarian cancer cell line SKOV3 into nude mice. Animals itted to different treatment groups:control group treated ice or samples ined by immunohistochemistry or e and the expression of VEGF ice ice(Plt;0.05). Conclusion: Octreotide inhibits the groan ovarian cancer cell line SKOV3 in vivo. 　　[Key atostatin,SST)是一种环状多肽类激素,由Brazeau等[1]于1973年从羊下丘脑中分离提取。现在认为SST对许多疾病如肿瘤、炎症、糖尿病、癫痫、早老性痴呆、帕金森病、亨廷顿舞蹈病以及艾滋病的发生、 发展 和防治具有重要意义[2]。奥曲肽(SMS201995,OCT)为SST 8肽类似物,是第一个用于临床的SST类似物，目前其主要用于肝癌、胃癌和胰腺癌的辅助 治疗 。 　 　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　基础培养液：RPMI 1640培养液，加入10%小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);胰蛋白酶(上海华美公司)：溶于DHanks液中配制成0.25%浓度;SST类似物OCT：由上海子能制药有限公司合成;顺铂(cisplatin):山东齐鲁制药厂产品，4 ℃保存;人卵巢癌细胞株SKOV3：购自第四军医大学西京 医院 妇产科实验室，细胞置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，0.25%胰蛋白酶消化细胞成单细胞悬液;雌性BALB/cnu/nu裸小鼠：购自 中国 医学 科学 院实验动物研究所，体重18～22 g，SPF环境下饲养;兔抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体：购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 卵巢癌裸鼠移植瘤模型的建立 将SKOV3细胞制成单细胞悬液,以5×106个细胞·只-1接种于裸鼠右侧腋窝靠近背部皮下，共接种20只。 　　1.2.2 药物干预移植瘤 建模2周后将20只裸鼠随机分成空白对照组、OCT组、顺铂组、OCT与顺铂联用组4组,每组5只。空白对照组皮下注射生理盐水100 μg·kg-1，1次·d-1;OCT组皮下注射OCT 100 μg·kg-1,1次·d-1;顺铂组分别于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射顺铂4 mg·kg-1;OCT与顺铂联用组皮下注射OCT 100 μg·kg-1,1次·d-1,并于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射顺铂4 mg·kg-1。用药4周后颈椎脱位法处死裸鼠，皮下剥离瘤体，称取肿瘤重量，游标卡尺测量肿瘤长径(a)和短径(b)，按公式V=ab2/2 计算 肿瘤体积。抑瘤率=(对照组瘤体积-实验组瘤体积)/对照组瘤体积×100%。肿瘤标本分为两份，1份置于10%中性缓冲福尔马林液中固定，常规脱水，透明，浸蜡，包埋，5 μm连续切片;另1份立即制成单细胞悬液行流式细胞分析。 　　1.2.3 病 理学 分析及免疫组织化学法检测VEGF表达 肿瘤切片行常规苏木精伊红染色，显微镜下观察肿瘤细胞形态。免疫组织化学染色采用两步法，结果判定以细胞浆呈清晰棕黄色为阳性，采用计算机图像分析软件ImagePro plus 4.5对VEGF阳性部位进行原位定量检测，每张切片随机选取5个视野，自动选取阳性部位并计算平均光密度(IOD)值,计算5个视野的平均值作为该切片的代表值。 　　1.3 统计学处理 　　结果以均数±标准差表示,数据处理采用SPSS 11.5统计软件，多组间比较采用方差分析,两两之间用q检验。Plt;0.05认为差异有统计学意义。 　 　2 结 果 　　2.1 OCT对裸鼠卵巢癌移植瘤生长的影响 　　20只裸鼠接种7 d后于接种部位皮下均可见直径约2 mm的瘤块，致瘤率为100%，用药满28 d时20只裸鼠均存活。处死裸鼠见肿瘤处皮肤表面无溃疡结痂，肿瘤包膜完整，均可用手推动。OCT组、顺铂组、OCT与顺铂联用组肿瘤重量及体积均明显低于空白对照组，差异有统计学意义。各用药组两两比较，肿