chap.4 virus-free and proporgation细胞工程.ppt

植物细胞工程从技术上说它是一种从单细胞到植株的无性繁殖技术。 从遗传的角度来讲它具有遗传的保守性和变异性。 植物的脱毒与快速繁殖即是建立在遗传保守性技术基础上的。 能够有效地保持优良品种的特性 离体无性繁殖由于繁殖体系是建立在体细胞系的基础上，繁殖过程在人工控制的环境条件下，所以既不会造成性状分离，也不会产生退化，同时还避免了病虫害的侵染，从而可以很好的保持品种的优良特性。是异交作物和无性繁殖品种繁育的理想途径。 快速推广优良品种 离体繁殖因为周期短(1～3个月)，不受季节限制，繁殖系数高(几十～几百倍)，因此其繁殖速度是任何其它方法所不能比的，所以离体繁殖又称之为快繁(rapid clonal propagation)。 生产无病毒种苗，防止品种退化 节约耕地，提高农产品的商品率 以变态器官为繁殖体的作物年产品用留作种的比例? 大 蒜：五到八分之一 马铃薯：十分之一 贝 母：三分之一 魔 芋：五分之一 便于运输 离体繁殖的种苗体积小，一般自带容器，很易携带。运输十分方便。以马铃薯为例来讲，按一亩地4000株计算，常规薯4000个重200kg(每个50g)，若用试管薯4000个则只有1kg左右(每个100-200mg)。 第二节 植物脱毒 基 本 原 理 茎尖脱毒是控制植物病毒的有效途径? 药物防治病毒病效率低， 抗病毒育种步履艰难 组织培养的高效隔离防治了病毒的再侵染? 基 本 原 理 Schematic representation of the production of virus-free plants ? ? virus-infect plant propogation of virus-free plants ? heat treatment? meristem culture virus testing  shoot formation virus testing  shoot multiplication ? rooting of shoots transfer of plant to soil? 1.母体植株的选择和预处理 母体的选择— 外植体预处理： 香石竹在38～40℃条件下处理两个月 菊花在35～38℃的条件下处理60天 马铃薯在37℃条件下处理10～20天。 柑橘－ 速衰病毒/黄化病毒40℃/30℃条件下处理7～12周。 鳞皮病毒需要在40℃/30℃条件下处理8周。 啐叶病毒需要在50℃条件下处理3～22小时。 青果病毒在50℃条件下处理30～40分钟。 2.茎尖分生组织培养再生植株 ?基本过程： 外植体消毒－茎尖剥离－茎尖培养 3.脱毒效果检测 ?指示植物鉴定(test plants) 所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。 血清鉴定(serologic test) 试管沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定(ELISA)。 RT-PCR检测 4.脱毒苗的保存与繁殖 ?脱毒苗的离体保存与繁殖 建立脱毒种苗生产繁殖网络体系 木本植物建立隔离的脱毒苗母本园 ???? 影响脱毒效果的因素 母体材料病毒侵染的程度 外植体的生理状态 起始培养的茎尖大小 第三节 离体无性繁殖(propagation in vitro) 离体无性繁殖是在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖的技术。跟常规的繁殖方法相比它是一种微型操作过程，因此，有时就直接称之为微繁(micropropagation)。 外植体选择 腋 芽 增 殖 培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能长期继代繁殖。这一繁殖方式一般不需要添加外源激素，如果某些植物需要使用激素，一定要严格控制浓度，以防止产生愈伤组织。 不定芽增殖 从现存的芽以外的任何器官、组织上通过器官发生重新形成的芽称之为不定芽。 特点：繁殖系数高， 遗传稳定性较好。 但继代次数有限。 体细胞胚增殖 增长率高，双极性免去生根环节，但胚状体休眠的诱导和解除还难以把握，其成苗率仍不高。目前除一些特殊用途外(人工种子)，这一途径还没有用于快繁技术。 愈伤组织增殖 所有的植物通过组织培养的方法均可以诱导愈伤组织，再进一步分化即可获得