牡丹皮高效液相色谱药效指纹图谱研究.doc

　　牡丹皮高效液相色谱“药效指纹图谱”研究 【关键词】 牡丹皮 活血化淤 高效液相色谱 药效指纹图谱 　　Abstract：ObjectiveTo find out the Pharmacodynamic Fingerprint ples of different parts for the study of activating blood circulation to dissipate blood stasis, at the same time, taking them for the study of HPLC to gain the fingerprints of different parts，and then the correlation betacological indexes and the information of the HPLC fingerprint ethanol part could represent the Pharmacodynamic Fingerprint of Cortex Moutan.ConclusionThe fingerprint established by this method not only represents the chemistry information but also reflects its validity, it makes the study of fingerprint more scientific and reasonable. 　　Key acodynamic Fingerprint 　　牡丹皮是一常用中药，收载于历版《 中国 药典》，本品为毛茛科芍药属植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮，具有清热凉血、活血化淤之功效［1］ 。牡丹皮中所含的主要有效成分为酚类（如丹皮酚）、萜类、苷类（如芍药苷）、鞣质等。2005年版《中国药典》对牡丹皮的质量控制仅局限于对丹皮酚一种成分的薄层鉴别和含量测定，不能全面反映牡丹皮的内在质量。姜潇等［2］ 采用HPLC色谱线性梯度洗脱程序，建立了可供鉴别牡丹皮药材的高效液相指纹图谱，这些均是化学信息，不能反映药物的有效性，即所得图谱并不一定能用来控制牡丹皮的有效性。本研究采用不同极性溶剂对牡丹皮进行提取，将其不同提取部位样品进行小鼠活血化淤实验研究，同时进行HPLC分析，获得牡丹皮不同提取部位的指纹图谱，然后运用数理统计软件，找出了与药效成正相关的色谱峰并制定出能代表牡丹皮有效性的HPLC指纹图谱。 　　 1 仪器与试药 　　2010A高效液相色谱仪（日本岛津）；KQ3200DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； 电子 天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；SOUTH990全自动血液流变分析仪（重庆南方医疗设备公司）。 　　丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号110708-200306）；乙腈为色谱纯；甲醇等试剂均为分析纯；水为娃哈哈纯净水；昆明种小鼠［雄性（20±2）g，购于河南省动物实验中心］；牡丹皮（采自河南省洛阳市土桥村）。 　　 2 方法与结果 　　2.1 药理实验研究 　　2.1.1 样品溶液的制备 　　水部位：取牡丹皮粗粉适量，加水浸泡30 min，然后煎煮15 min，放凉，滤过，滤液浓缩至0.3 g药材/ml的溶液，备用。 　　其它部位：取牡丹皮粗粉适量，分别加甲醇、醋酸乙酯、乙醚加热回流提取1 h，加入正丁醇超声提取30 min，放凉，滤过，得到各单一溶剂提取部位，再将各部位以相当于药材的量1∶1两两混合（包括水部位），滤液减压回收溶剂至干，加0.5％CMC-Na溶液制成0.3 g药材/ml的混悬液，备用。 　　共得到15个不同提取部位的样品溶液。 　　2.1.2 小鼠活血化淤实验研究取昆明种小鼠180只［雄性，（20 ±2）g］，随机分成18组，每组10只，分别为15个提取部位的有效剂量组（0.4 ml/只）、模型对照组（0.5％CMC-Na溶液）、阳性对照组（尼莫地平0.4 mg/只）和空白对照组（0.5％CMC-Na溶液）。连续以有效剂量灌服16 d，除空白对照组外，其余各组均同时每天后腿肌肉注射地塞米松磷酸钠注射液0.2 ml(16 μg/ml),于第16天给药1 h后，摘除双侧眼球取血，置加有肝素钠的离心管中，充分振摇，测定全血粘度。 　　2.2 HPLC指纹图谱研究 　　2.2.1 供试品溶液的制备 　　水部位：取牡丹皮粗粉0.2 g，精密称定，置烧杯中，精密加入水50 ml，称重，浸泡30 min，然后煎煮15 min，取出，放冷，称重，用水补足减失的重量，滤过。精密量取续液5 m