芽孢杆菌发酵中药复方与抑菌活性检测.docVIP

芽孢杆菌发酵中药复方及抑菌活性的检测 中草药饲料添加剂属于天然药物，大量实验研 究表明，中草药饲料添加剂具有促进动物生长发 育（李宗辉等，2002）、提高饲料转化率、改善畜禽产 品质量（李洪龙等，2007；刘根新等，2007）、增强动 物免疫功能等作用（王丽辉等，2007），其研究和应 用已受到国内外学者的普遍关注。随着对中药制剂 的深入研究，微生物发酵中药成为一种新的中药炮 制方法。微生物具有非常丰富的酶系统，具有强大 的分解、转化物质的能力，通过微生物的降解作用， 中药的有效成分和活性物质被最大限度的释放出 来。另外，微生物发酵中药的过程中，中药的一些成 分可能诱导微生物的某些代谢途径发生变化，从而 产生新的活性物质（韩春杨等，2005）。 科宝天然植物草粉主要成分为脱毒紫茎泽兰 草粉，目前已经作为饲料添加剂大量应用于畜牧生 产，具有提高生产性能、抑菌及抗病毒的作用。紫锥 菊具有显著的免疫增强和抗病毒作用，是国际上研 究比较热门的免疫调节剂（肖培根，1996）。中药板 蓝根具有清热、解毒之功效。实验中选用公司菌种 保藏中心保存的三株性能较好的芽孢杆菌，芽孢菌 7348、Zfy4、地衣芽孢菌对植物草粉、板蓝根、紫锥 菊的不同组方进行发酵，并检测了发酵产物对大肠 杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用，筛选 最佳发酵菌株及中药组方，旨在为研发出新型抗 菌、抗病毒产品提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 材料 菌株：芽孢菌 7348、Zfy4、地衣芽孢菌由山东宝 来利来生物研究院菌种保藏中心保存；指示菌：大 肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌由山东宝来利 来生物研究院菌种保藏中心保存。 中药：科宝天然植物草粉由昆明科宝饲料有限 公司提供；板蓝根购买自永春堂药店；紫锥菊由陕 西嘉禾药业提供。 1.2 方法 1.2.1 复方中药分组，见表 1。 1.2.2 中药发酵 [摘要]本文开展了芽孢杆菌 7348、Zfy4、地衣芽孢菌对植物草粉、板蓝根、紫锥菊的不同组方进行发酵，并检测了发酵产物 对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的生长抑制作用。实验结果显示：芽孢菌 7348 发酵中药复方 2 和复方 5，发酵后芽孢 菌活菌数最高，且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有显著地抑菌作用。研究结果表明芽孢菌发酵中药的过程中，微 生物与中草药的相互作用，使中药复方的有效成分被释放出来，从而增强了中药复方的抗菌活性。 [关键词]芽孢杆菌；发酵；中药复方；抑菌活性 中药复方 植物草粉：板蓝根：紫锥菊 组方 1 5︰1︰4 组方 2 5︰2︰3 组方 3 5︰1︰:1 组方 4 5︰3︰2 组方 5 5︰4︰1 表 1 复方中药分组 · 24·表 3 中药复方发酵液对大肠杆菌、沙门氏菌的抑制作用 中药复方 / 菌株 未发酵 7348 地衣芽孢菌 Zfy4 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 沙门氏菌 培养基 — — — — — — 组方 1 — — 低敏 中敏 — — — — 组方 2 低敏 低敏 中敏 高敏 — — 低敏 中敏 组方 3 低敏 低敏 中敏 高敏 — — — — 组方 4 — — — — — — — — 组方 5 低敏 低敏 高敏 高敏 — — 低敏 低敏 注：抑菌圈直径大于 20mm 为极敏，抑菌圈直径 15～20mm 为高敏，抑菌圈直径为 10～15mm 为中敏，抑菌圈直径小于 10mm 为低敏，无 抑菌圈的为不敏感，用“-”表示。 表 2 芽孢菌菌株生长的影响（CPU×10 8 ） 中药复方 / 菌株 7348 地衣芽孢菌 Zfy4 芽孢培养基 2.04 2.85 2.1 组方 1 12.0 0.001 12.6 组方 2 11.0 0.0015 14.8 组方 3 13.8 0.001 9.3 组方 4 7.2 0.002 14.9 组方 5 15.8 0.0015 11.3 广东饲料 第 22 卷第 11 期 2013 年 11 月 试 验 研 究 将中药磨粉后，按照组方比例混匀称取 8g 于 250mL 的三角瓶中，加入 80mL 纯净水，121℃灭菌 30min，每瓶按照 4%浓度接入芽孢杆菌菌液，37℃、 转速 180/min 摇床培养 30h，并设未发酵中药、芽孢 菌菌液为对照。 1.2.3 平板计数法检测活菌数 发酵 30h 后，终止发酵，每瓶取 1mL 发酵液于 含 9mL 的生理盐水的试管中，充分震荡均匀后取 1ml 于下一个试管中，以此倍比稀释到所要的稀释 度（本实验取 10 -5 、10 -6 、10 -7 、10 -8 个稀释度），将每个 稀释度取 1mL 滴在灭菌平板上，两个重复，然后加 入 50℃芽孢培养基，摇匀，37℃培养 24h，进行菌落 计数。 1.2.