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MASSARRAY原理
MassARRAY
图〔1〕
MassARRAY系统由美国Sequenom 公司开发,在癌症研究、遗传学分析、分子诊断和药学等领域已经得到越来越广泛的应用,受到全球多个顶尖研究中心的推崇。应用领域飞行时间质谱技术搭配不同Sequenom的检测和软件模块,可以在一个平台上实现 SNP分型以及SNP位点等位基因频率计算
体细胞突变检测和分析
甲基化定量分析
基因表达定量分析
CNV检测分析寡核苷酸质量控制和检测检测服务流程
客户提供DNA或者各类生物样本以及检测位点信息
样本完整性检测以及前处理
引物设计、合成
PCR扩增、SAP纯化、延伸或转录裂解
点样
质谱分析
分析报告
1、技术名称
Sequenom MassARRAY SNP基因型分析技术MassARRAY技术流程:
2、技术原理
Sequenom SNP 检测系统基本原理为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 技术。主要特点是,PCR扩增后的产物,加入SNP序列特异延伸引物,在 SNP 位点上,延伸 1个碱基。然后将制备的样品分析物与芯片基质共结晶,将该晶体放入质谱仪的真空管 , 而后用瞬时纳秒 (10-9s) 强激光激发,由于基质分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,核酸分子就会解吸附并转变为亚稳态离子,产生的离子多为单电荷离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能,进而在一非电场漂移区内按照其质荷比率加以分离,在真空小管中飞行到达检测器。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time-of-Flight,TOF)检测器来检测,离子质量越小,就越快到达。理论上讲,只要飞行管长度足够,TOF检测器可检测分子的质量数是没有上限的。MASSARRAY SNP 检测的质谱范围为5000到8500 Dalton。
图2:飞行时间质谱法对SNP进行分型的原理示意图
质谱检测
?3、?技术特点
灵活:
¨???????? 可以自由选择感兴趣的SNP位点
¨???????? 一张芯片上,样本的数量和位置可以自由选择
¨???????? 一张芯片上,样本和SNP位点的配对可以自由选择
准确:
¨???????? 直接检测待测物分子量,准确度超过99.7%¨???????? 质谱技术灵活检测PCR实验失败或三等位基因的存在高通量:
¨???????? 一张芯片上可完成384个样品的多重iPLEX GOLD实验
¨???????? 每个反应孔可实现多达40重反应
¨???????? 每天最多能进行十万个基因型分析
性价比高:
¨???????? 无需荧光标记,成本大大降低
¨???????? 即便在低通量的情况下每个基因型分析的成本仍然很低
上海枫林医药临床检验有限公司
上海枫林医药临床检验有限公司作为上海医药临床研究中心的中心实验室是该中心技术支持服务的核心平台.枫林检验作为一个独立的临床实验室服务提供者可以为各级医疗机构提供广泛而专业化的外包检验服务也可以为国内外各医药研究机构提供“独立第三方” 形式的临床研究检测服务。实验室以美国病理家协会(CAP)和ISO15189的质量认证体系为框架进行建设,并构建了与国际接轨的自动化信息系统。具体业务包括药物分析、药物代谢动力学、药效学等药物临床研究服务;血液、生化、微生物、免疫、分子生物学和病理等常规检验服务;以及生物基因分析、生物标志物检测等技术服务。 ...
优势:
(1)质谱仪检测的是分子最本质的特征之一——分子量,不涉及荧光标记、凝胶电泳等,就能检测一个碱基的差异,准确性高,机器本身出错的概率非常低;
(2)质谱仪的灵敏度非常高,检测窗口内,任何pmol级别的物质都能被检测出来;
(3)通量高:几秒就能检测完一个反应孔;
(4)操作简单,仪器要求简单,除质谱仪外,都是常规PCR仪器;
(5)灵活:每天可以完成几个反应至上万个反应;
(6)便宜:引物不带荧光标记,普通长度(3条引物总长80bp左右),此外在一个反应孔内能完成4个或更多的反应,即通常所说的4重反应;
(7)兼容性强:质谱仪还能在核酸的其它方向,以及蛋白质组学、微生物鉴定等领域也能应用。
(8)质谱技术是“一管式操作”,即反应体系在生化学实验过程中始终在一个试管内反应,没有多次转移,这样就减少被污染的概率。?
DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用。MassARRAY 分子量阵列基因分析系统EpiTYPER DNA甲基化分析技术结合了碱基特异性酶切反应和MALDI-TOF测序原理。两者的完美结合使得该技术成为高准确性、高通量及高灵敏度的DNA甲基化定量分析手段。
MassARRAY分子量阵列基因分析系
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