HSFl与HMGB1和IL-1O作用分子机制的体外研究及意义.pdfVIP

医学杂志 2012年第 28卷第 24 HSF1与 HMGB1和 IL一1O作用分子机制的 体外研究及意义 艾云智 陈丹 罗文福 张先安 罗成群 摘要 目的：本研究以RAW264．7细胞系为研究对象，烧伤血清刺激建立烧伤细胞模型 ，在体外研 究 HSF1的抗炎症机制。方法：Westernblot法检测烧伤血清刺激前后RAW264．7细胞 中HSF1与NF-KB表达 ， 凝胶 阻滞法(EMSA)检测HSF1与炎症因子HMGB1和抗炎症因子 IL．1O基 因启动子区相互作用，同时检测 NF．KB是否参与上述的相互作用。结果：正常培养条件下的RAW264．7细胞几乎不表达HSF1，少量表达 NF—KB．加入烧伤血清刺激后大量表达HSFI和NF—KB。HSF1与HMGBI和 [L-10基因的启动子 区HSE有相 互作用 NF．KB不参与HSF1与HMGB1和 IL一10基因启动子区HSE的结合。结论：HSF1与HMGB1和 IL一10 的启动子 区HSE结合．抑制 HMGB1的表达，促进 IL—l0的表达。在炎症反应 中HMGB1和 IL一10的表达不 直接受 NF—KB的调节。 关键词 HSF1； HMGB1； IL一10； NF—KB； 抗炎症作用 热休克反应 (heatshockresponse，HSR)是生物 研究从细胞及分子水平，深人探讨 HSF1抗烧伤炎 细胞在高温、毒物、自由基及感染等应激原作用 症反应的分子机制 ，揭示烧伤炎症反应中细胞内 下，以基因表达变化为特征的一种防御适应反应， 源性保护分子机制 ，以开创抗炎研究的新思路和 所诱导表达的一组蛋白质称为热休克蛋白(heat 新途径 。 shockproteins。HSPs) 。HSPs具有重要的分子伴 1 材料与方法 侣 (molecularchaperone)功能，在细胞 内源性保护 1．1 实验材料 健康sD大鼠，体重 (240±20)g， 中具有重要作用，热休克因子 1(heatshockfactorl， 雌雄各半 ，购于湖南农业大学实验动物 中心 ； HSF1)是最早被发现的热休克转录因子，在各种应 RAW264．7巨噬细胞株。中南大学湘雅医学院病理 激反应 ，特别是热休克反应时调控 HSPs的诱导表 生理学教研室赠送 。 达中发挥重要作用 ，在正常状态下 ，HSF1以无活 1．2 主要试剂和仪器 凝胶 电泳迁移分析试剂盒 性的单体形式存在于胞浆中，在热休克反应的应 购 自Pierce公司，Anti—HMGB1、Anti．I1．10、Anti—NF— 激状态下，HSF1被激活 ，转变为三聚体 ，移位至胞 KB(兔多克隆抗体 ，Abcom公司)，Anti—HSF1(大鼠 核 ．结至HSPs基因5端启动子区的热休克元件 单克隆抗体 ，Stressgen公司)，蛋白质抽提试剂盒购 (heatshockelement．HSE)而启动各种 HSPs基因的 于Chemicon公司。辣根过氧化酶标记的兔抗羊IG 诱导表达Ll3]。 二抗 、EeL发光试剂盒购 自Santacruz公司，倒置显 严重烧伤激活了机体的热休克保护机制而调 微镜(Olympus，Japan)，电泳仪(北京六一仪器厂)， 控 高迁移率族蛋 白 l (highmobilitygroupbox1， 半干转膜仪 (Bio—Rad)、低温冷冻高速离心机 HMGB1)和 白细胞介素一10(Interleukin一10，IL-10) (Eppendorf5804R，German)，一80℃低温冰箱 (美国 等烧伤炎症介质的表达和释放 ，HSF1参与了多 FORMA公司)。 数炎症介质基因的表达调控，而烧伤炎症反应中 1．3 烧伤血清获取 取健康 sD大鼠，腹腔注