MTT法检测石刁柏悬浮细胞技术的研究.pdfVIP

生物技术通报 · 研 究报告 · BloTECHNoLoGY BULLETIN 2008年第 1期 MTT法检测石刁柏悬浮细胞技术的研究 洪亚辉 周涌 周向华 程鹏 张永和 ( 湖南农业大学生物科学与技术学院，长沙 410128； 湖南农业大学 湖南省植物激素与生长发育重点实验室，长沙 410128) 摘 要： 本研究确定了MTT法测定悬浮培养的石刁柏细胞活力所需的最适条件为：比色波长560nm，最适缓冲 液为柠檬酸钠一Vc缓冲液，渗透促进剂为二甲基亚砜，洗脱剂为酸化异丙醇，O．133~／0o浓度的MTT溶液适于对未知培养时 期的细胞计数，O．267％o浓度的MTT溶液适于鉴定细胞活力；同时，本研究通过MTT对培养细胞的生长过程进行了测 定，确定细胞活性最强时期为指数期；并研究了细胞数量与吸光值之间的关系以及培养时间对MTT染色的影响。 关键词： 石刁柏 MTT 细胞活力 Research on MTT Method for Detecting the Cell Viability of Asparagus suspended Cells Hong Yahui 。 Zhou Yong Zhou XianghHa Cheng Peng~ Zhang Yonghe ( College of Bioscience and Technological，Hunan Agricultural University，Changsha 410128；2Hunan Provincial Key Laboratory of Phytohormones and Growth Deve·lopment，Hunan A gricultural University，Changsha 410128) Abstract： This research optimized the MTT method for detecting the cell viability of the asparagus suspended cells．The optimized condition：560nm Colorimetric wavelength，sodium citrate—Vc(Na2HPO4．C6H807(0．1mol／L，PH7．0)is the buffer，DMSO is used to enhance the permeability of cel1．The rinse buffer isacidic isopropy1．O．133％o MTT is appropriate for counting the cells growing at an unknown phase．O．267％o MTT is proper to be used for detecting the cell viability．Additionally，thisresearch showsthatthe most strong cell activity is on the exponentialgrowth phase． Meanwhile．boch che relationship between cell amounts and its optical density．and effect of che culture time on the MTT staining cell are also studied in this research． Key words： Asparagus MTT Cell viability 前言 MTF(Thiazolyl blue)，即噻唑蓝，四甲基偶氮唑盐，化学式 C，8H，6N5SBr，淡黄色，溶于水和醇，不溶于氯 仿，2～8℃保存。淡黄色的MTY被活细胞的线粒体琥珀酸脱氢酶分解产生蓝紫色结晶状甲瓒颗粒，聚积在 细胞周围和细胞内，聚积的量与细胞活力成正比。 自从 1983年美国学者Mosmam…首次报道能快速测定细胞增殖和细