miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究.pdfVIP

http：／／www．china~．net E．mail：zgqkyx@chinagp．net．cn ·2513 · 著 · miR一150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究 张先锋 ，黄远见，肖娟，张志伟，黄卫国 【摘要】 目的 探讨miR一150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4 (PDCD4)促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭， 进一步揭示miR一150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法 2014年3__6月，培养鼻咽癌细胞株 CNE一2，取生长 良好的 CNE一2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列，连接到含有荧光素酶载体质粒上，检测荧 光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pcDNA3．1(+) 一PDCIM、miR—ctr、miR一150mimics联合pcDNA3．1(+)一 PDCD4于CNE一2，48h后采用Westernblotting法检测 PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pcDNA3．1(+) 一 PDCD4、miR一150inhibitors、miR一150mimics联合 pcDNA3．1(+)一PDCD4于CNE一2，分别于培养24、48、72、 96h后测定其 吸光度 (OD)值，反 映其增殖能力。分别瞬时转染 Vector、pcDNA3．1(+) 一PDCD4、miR一150 inhibitors、miR一150mimics联合pcDNA3．1(+) 一PDCD4于CNE一2，采用 Transwe11侵袭实验检测 CNE一2侵袭能 力。结果 无miR一150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为 (0．975±0．112)，miR一150转染的PDCD4野生型 细胞株荧光素酶活性为 (0．588±0．042)，差异有统计学意义 (t：7．853，P=0．018)。无miR一150转染的PDCD4突变 型细胞株荧光素酶活性为 (0．992±0．135)，miR一150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为 (0．8754-0．095)， 差异无统计学意义 (t=1．461，P=0．281)。转染 Vector、pcDNA3．1(+)一PDCD4、miR—ctr、miR一150mimics联 合 pcDNA3．1(+)一PDCD4的 CNE一2PDCD4表达水平分别为 (0．655±0．058)、 (1．147±0．152)、 (0．704 ±0．068)、(0．313±0．036)，差异有统计学意义 (F=43．410，P0．001)；其中，转染 Vector、miR—etr、miR一150 mimics联合pcDNA3．1(+) 一PDCD4的CNE一2PDCD4表达水平均低于转染pcDNA3．1(+) 一PDCD4的CNE一2， 差异有统计学意义 (P0．05)。转染物和时间对 CNE一2增殖能力存在交互作用，转染物和时间对CNE一2增殖能力 均存在主效应 (P0．001)。转染 Vector、pcDNA3．1(+) 一PDCD4、miR一150inhibitors、miR一150mimics联合 pcDNA3．1(+)一PDCD4的CNE一2穿膜细胞数分别为 (56．6±7．5)、 (26．5±3．7)、 (30．5-44．7)、(55．2±6．9) 个 ，差异有统计学意义 (F=18．550，P=0．014)；其 中，转染 pcDNA3．1(+) 一PDCD4、miR一150inhibitors的 CNE一2穿膜细胞数少于转染Vector、miR一150mimics联合pcDNA3．1(+)一PDCD4的CNE一2，差异有统计学意义 (P0．05)。结论 miR一150通过抑制 PDCD4的表达 ，继而增强鼻咽癌细胞的增殖能力和侵袭能力。 【关键词】 鼻咽肿瘤；miR一150；程序性细胞死亡因子4；细胞增殖；侵袭 【中图分类号】R739．63 【文献标识码】A DOI：10．3969／j．issn．1007—9572．2016．21．005 张先锋，黄远见，肖娟，等 ．miR一150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究 [J]．中国全科医学，2016，19 (21)：2513—2517．[www．chinagp．net] ZHANGXF，HUANGYJ，XIAOJ，