microRNA-26b对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的影响.pdfVIP

广东医学 2013年 6月 第34卷第 11期 GuangdongMedicalJournalJun．2013，Vo1．34，No．11 · l651 · microRNA一26b对宫颈癌 HeLa细胞增殖和 侵袭的影响牢 凌燕，彭诗维，熊员焕，高军 江西省人 民医院妇产科 (南昌330006) 摘【要】 目的 探讨microRNA一26b(miR一26b)在宫颈癌组织的表达水平及其对宫颈癌HeLa细胞增殖和 侵袭的影响。方法 收集36例宫颈癌及癌旁组织的手术标本，应用实时荧光定量PCR技术，检测miR一26bmRNA 的表达水平。以人宫颈癌细胞系HeLa细胞为研究对象，转染 miR一26b成熟体及反义核苷酸，通过MTS方法和 Transwell实验检测 miR一26b对HeLa细胞增殖和侵袭的影响。结果 (1)miR一26bmRNA在宫颈癌组织中呈低 水平表达。(2)MTS实验研究显示，与空白对照组 (仅加转染试剂)相比，转染miR一26b成熟体 ，HeLa细胞的增殖 能力明显下降(P0．01)；转染miR一26b反义核苷酸，HeLa细胞的增殖能力明显增强(P0．01)，而无义对照，没 有明显变化 (P0．05)。(3)Transwell小室实验研 究显示，与空白对照组相比，转染miR一26b成熟体，HeLa细胞 的侵袭能力明显下降(P0．01)；转染miR一26b反义核苷酸，HeLa细胞的侵袭能力明显增强(P0．05)，而无义 对照，没有明显变化(P0．05)。结论 miR一26b具有抑制HeLa细胞的增殖和侵袭作用，miR一26b可能成为治 疗 宫颈癌 的靶基 因。 【关键词】 microRNA一26b；宫颈癌；HeLa细胞；增殖；侵袭 microRNA(miRNA)是一类内源性的、长度为21— 胞库)，Tfizd和转染试剂脂质体 Lipofeetamine 2000 25寡核苷酸组成的单链非编码小分子 RNA，广泛存在 (invitrogen公司)，miRNA成熟体及反义核苷酸、One 于真核细胞中，可通过与靶基因的信使 RNA的3UTR StepPrimeScript@ miRNAeDNASynthesisKit和 SYBR~ 端碱基相对或完全性地配对，抑制靶基因的翻译或直 PremixExTaq 11(PerfectRealTime)kit(大连TaKaRa 接促使其降解，从而在转录后水平调控基因表达u。 公司)，FD培养基 (Hyclone公司)，Matrigel(BD公司)， 目前研究证实 ，在多种疾病的表达谱中miRNA的表达 MTS试剂盒 (Promega公司)。 水平发生明显的改变，特别是在肿瘤的研究领域 ，相关 1．2 临床标本 取 自2010年 7月至2012年 7月在 研究提示 miRNA与肿瘤的发生发展密切相关 。 江西省人民医院妇产科接受手术治疗 的宫颈癌患者 宫颈癌是一种最常见的妇科恶性肿瘤之一 ，其发病率 36例，年龄 35—72岁，平均 (54．3±12．3)岁。标本组 仅次于乳腺癌。近年来我国宫颈癌发病率和病死率逐 织分为宫颈癌组织和癌旁组织，所有标本组织均行 HE 年上升，并呈现年轻化趋势。病因学研究显示，高危型 染色病理确诊，在离体 30rain内一80℃保存。标本取 人乳头瘤病毒 (humanpapillomavirus，HPV)的感染在宫 材获得江西省人民医院伦理委员会的批准和患者的知 颈上皮细胞恶性转化 中发挥着重要作用 ，但有关其 情同意。 发生的具体分子机制尚不清楚。最近 ，LUI等 通过 1．3 细胞培养和转染 HeLa细胞系培养于含 10％ 基因测序方法 ，比较6种宫颈癌细胞系与5个正常宫 胎牛血清FD培养液中，以细胞2×10个／孔种植于六 颈组织 ，发现 let一7b、let一7c、miR一26b、miR一196b、 孔培养板中，当细胞长至60％ ～80％时，用 Lipofeeta— miR一21和 miR一143等几种miRNA明显下降。而已 min 2000试剂将 miR一26b成熟体、反义 miR一26b 有研究显示 iniR一26b与其他肿瘤 的发生密切相 及 scramblemicroRNA(阴性对照