苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用及其机制.docVIP

　　苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用及其机制 ：种铁，付德来，牛建强，李和程，张鹏，甘为民，王子明 【摘要】 目的观察苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌ACHN细胞株24、48、72、96h，采用MTT 法观察苦参碱对ACHN的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱对ACHN细胞凋亡的影响;免疫细胞化学技术检测苦参碱对ACHN细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果不同浓度的苦参碱对ACHN细胞株均有一定的增殖抑制作用，且呈量效和时效关系;苦参碱能明显诱导ACHN细胞株凋亡;苦参碱作用后，ACHN细胞株Bax蛋白表达明显增强，Bcl-2蛋白表达有下降趋势，但无统计学差异。结论苦参碱对体外培养的人肾癌ACHN细胞株有显著的增殖抑制作用，其机制可能与调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值、诱导细胞凋亡有关。 【关键词】 苦参碱;肾癌;ACHN细胞株 　ABSTRACT: ObjectiveTo observe matrines inhibitory effect on the groan renal cell carcinoma in vitro and explore its possible mechanism.MethodsThe cell line of ACHN human renal cell carcinoma atrine of different concentrations for 24, 48, 72 and 96h, respectively. MTT assay atrine on ACHN cells. The ACHN cell apoptosis induced by matrine ission electron microscopy and floetry. The expressions of Bcl-2 and Bax proteins munocytochemical technique.ResultsMatrine of different concentrations had a cytotoxic effect on ACHN cell line in obvious dose- and time-dependent manners. Matrine could obviously induce apoptosis of ACHN cell line. Bax protein expression a in vitro, ay be related to dooting cell apoptosis. 　　KEY a)是从传统中药苦参、苦豆子中提取的生物碱(图1)，目前临床上广泛用于慢性病毒性肝炎的治疗[4-5]。近年研究发现，苦参碱对肺癌[6]、肝癌[6-7]、乳腺癌[8]、胃癌[9]等多种肿瘤的生长均表现出抑制作用。我们前期研究亦发现，苦参碱对体外培养的人肾颗粒细胞癌GRC-1[10]、透明细胞癌786-O[11]细胞株具有显著的生长抑制作用。本研究拟应用不同浓度的苦参碱作用于人肾癌ACHN细胞系，进一步观察其对人肾透明细胞癌的生长抑制作用。图1苦参碱的结构Fig.1 Structure of matrine 　 　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1细胞株人肾颗粒细胞癌ACHN 细胞株购自 中国 典型培养物保藏中心(CCTCC)，在常规37℃、50mL/L CO2及完全饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。 　　1.1.2主要试剂苦参碱由西安鸿生生物技术有限公司惠赠，纯度gt;98%;优级新生牛血清购自兰州民海生物工程有限公司(批号No.2008517);RPMI 1640培养基购自美国Gibco公司(批号No.1285082);膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-fluorescein isot hiocyanate/propidiumiodide, Annexin Ⅴ-FITC/PI)双标记染色试剂购自深圳晶美生物工程有限公司(批号No;Bcl-2抗体(批号No.10205)和Bax抗体(批号No.H0105)均为美国Santa Cruz公司产品;链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-biotin-peroxidase method, SP)鼠二抗试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司(批号No。 　　1.1.3主要仪器POLARstar OPTIMA 多功能微板测试系统购自德国BMG LAB TEC公司;FACSCalibur流式细胞仪购自美国BD公司;P