p21Waf1／Cip1甲基化调控细胞衰老.pdfVIP

重庆 医学 2015年 3月第 44卷第 8期 1O35 论著 ·基础研究 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．08．008 p21 n p甲基化调控细胞衰老 张爱红 ，郑全辉 ，郑茗予。，郑爱华 (1．河北省唐山市工人 医院ICU 室 063000；2．河北联合大学基础 医学院免疫室， 河北唐山 063000；3．河北省唐山市第一 中学 063000) [摘要] 目的 探讨 p21w 启动子 甲基化改变对细胞 衰老进程 的影响。方法 采用克隆、测序 的方法定量检测 p21Wail／ 启动子在人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)衰老过程 中的甲基化改变；RT—PCR和 Westernblot检测p21 “ 的表达 ；采 用 5一氮杂一2一脱氧胞苷去 甲基化处理 2BS细胞 ，通过 MTT和 半乳糖苷酶染 色检测细胞衰老 。结果 p21 “ 启动子在年轻 2BS中，CpG 甲基化 的发生率为 1．25 ；在 中年细胞 中为 27．27％；在衰老 2BS细胞 中为 0．64％；p21 “／c 的表达在细胞衰老过 程 中呈波动性变化 ，先增加 ，后降低 ，到细胞开始衰老时，表达又显著增加 ；中年 2BS细胞经 5一氮杂一2一脱氧胞苷处理后 ，p21 “ 表达增加 ，细胞增殖速率较正常中年细胞显著降低 ，同时细胞 8一半乳糖苷酶染色阳性率增加。结论 p21 “ 去 甲基化加速细 胞衰老 。 [关键词] 细胞衰老；p21 “ ；DNA 甲基化 ；5-氮杂一2一脱氧胞苷 [中图分类号] R339．3 [文献标识码] A [文章编号] 1671—8348(2015)08—1035—04 Cellularsenescenceisregulatedbyp21 “／ methylation ZhangAihong ，ZhengQuanhui ，ZhengMingyu。，ZhengAihua (1．TangshanOongrenHospital，Tangshan，Hebei063000，China；2．HebeiUnitedUniversity，Tangshan， Hebei063000，China；3．TangshanNo．1HighSchool，Tangshan，Hebei063000，China) -{Abstract] 0hiective Toexploretheeffectofp21 “ methylationchangesontheprocessofcellularsenescence．Methods Bisulfitesequencingwasusedtoanalyzethemethylationchangesofp21 “ intheprocessofcellularsenescence：p21 ex— pressionwasdetectedbyRT-PCR andW estern—blot；M iddle-aged2BScellswastreatedby5-aza—CdR and cellularsenescencewas detectedbyMTT andSA-8一Galstaining．Results Bisulfite sequencing analysisofp21 “。 promotershowedthatCpGswere methylatedby1．25 intheyoung2BScells，by27．27 inthemiddle—aged2BScells，whileonlyby0．64 inthesenescentcells． Theexpressionofp21Wail／0-p was1OW intheyoung(28PD)2BS cells，itincreasedfirst(35PD)butdecreasedlaterinthemiddle— aged(42PD)cells．Inthesenescent2BS cells，p21Wall／ expr