p38丝裂原活化蛋白激酶在结直肠癌组织中的表达及意义.pdfVIP

广东医学 2012年6月第 33卷第 11期 GuangdongMedicalJourn~ June．2012，Vo1．33，No．11 · 1581 · p38丝裂原活化蛋 白激酶在结直肠癌组织中的 表达及意义米 邹湘才，魏宜胜 ，梁国健 广州医学院第二附属 医院胃肠外科(广州 510260) 【摘要】 目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在结直肠癌组织中的表达及意义。方法 应用免 疫组织化学法检测50例结直肠癌组织及癌旁正常组织中p38MAPK的表达情况，同时应用半定量逆转录聚合酶 链反应 (RT—PCR)检测p38MAPK的mRNA表达水平。结果 p38MAPK在结直肠癌及癌旁正常组织的表达差异 有统计学意义(P0．01)，其表达与病理分级、淋巴结转移有关，与年龄、性别、肿瘤大小无关。结论 p38MAPK 的过表达可能与结直肠癌的发生、发展、转移有关。检测p38MAPK的表达水平对评价结直肠癌恶性程度及转移 机制具有重要的临床价值。 【关键词】 结直肠癌；p38丝裂原活化蛋 白激酶；免疫组织化学；RT—PCR 丝裂原活化蛋 白激酶 (rnitogenactivatedproteinki- 室温孵育45min，PBS冲洗3次后DAB显色，苏木素复 nase，MAPK)链是真核生物信号传递网络中的重要途 染细胞核。用0．1mol／LPBS代替一抗作为阴性对照。 径之一，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关 本研究结果在双盲法下进行结果判定，以肿瘤细胞内 键作用…。p38MAPK属于 MAPK亚家族中的重要一 出现棕黄色或黄色颗粒视为 p38阳性表达。p38阳性 类 ，在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥着重要作用。 染色主要位于胞质中。每张切片用随机的方法选取5 研究发现 p38MAPK在几种人类恶性肿瘤细胞系中呈 个高倍视野，每个视野计数 100个瘤细胞。着色强度： 高度表达 ，表明该通路在调节肿瘤发病、耐药、转移中 无色为0，浅黄色为 1，棕黄色为2，棕色为3。以5个视 起重要作用 。本研究通过免疫组化及半定量逆转录 野阳性细胞平均百分率为该张切片的阳性细胞百分 聚合酶链反应 (RT—PCR)方法，在人结直肠癌及癌旁 率。没有阳性细胞为0分，30％为 1分 ，30％～70％ 正常黏膜中检测 p38MAPK的表达情况和定位 ，探讨其 为2分，70％为3。由染色的总数和染色强度共同决 在结直肠癌发生 、发展中的意义。 定最终结果。总值 0为阴性 (一)，1—2为弱 阳性 1 资料与方法 (+)，3～4为中等阳性 (++)，5～6为强阳性 (++ 1．1 一般资料 收集本院2009年 11月至2010年 10 +)。13为高表达，≤2为低表达。 月手术切除的结直肠癌标本50例。其中男25例，女25 1．3．2 半定量 RT—PCR RNA提取和保存，定量和 例，年龄30～86岁，中位年龄65．6岁，均经病理学检查 定性按照逆转录试剂盒说明进行第一链 cDNA的合 确诊为结直肠癌。患者术前均未经过放化疗治疗。 成。PCR反应条件为 95℃预变性 5min；95℃ 30S， 1．2 试剂及仪器 兔抗人 p38多克隆抗体为 Cell 56℃20s，72cI=40S，共30个循环；72℃延伸4min。琼 Signaling公司产品，免疫组化试剂盒采用北京中衫金 脂糖凝胶电泳分析各基因的定量 PCR终产物，检测 目 桥公司的二步法免疫组化检测试剂盒。PCR引物由生 的基因是否得到特异性扩增。引物序列 ：p38MAPK上 工生物工程 (上海)有限公司合成 ，逆转录试剂盒、荧 游：5一GAACAAGACAATCTGGGAGGTC~ 一3，p38MAPK 光定量 PCR试剂盒均购 自TOYOBO公司。 下游：5一GCAGTICTCTGTAGGTIC1-1w CGC一3；GAP． 1．3 方法 每例标本均在标本取出后 30min内采 DH上 游：5 一CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA一3， 集 ，结