海能仪器：用于挥发性盐基氮测定研究报告凯氏定氮法.PDF

海能仪器：用于挥发性盐基氮测定研究报告 （凯氏定氮法） 1 挥发性盐基氮 挥发性盐基氮 （TVB-N）指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分 解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质具有挥发性，其含量越高，表明氨基酸被破 坏的越多，特别是蛋氨酸和酪氨酸，因此营养价值大受影响。挥发性盐基氮的含量直接反映 肉的新鲜程度。国家标准规定：一级鲜肉≤15mg/100g，二级鲜肉15-25mg/100g，腐败肉≥ 25mg/100g。 2 挥发性盐基氮常用检测方法 2.1 半微量定氮法 蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质 具有挥发性，测定时使用高氯酸溶液浸提，在碱性溶液中蒸馏出后，用硼酸吸收液吸收，再 以标准滴定酸溶液滴定计算含量。 2.1.1 试剂 氧化镁混悬液 （1%）：称取1.0g氧化镁，蒸馏水溶解定容至100mL容量瓶中，摇匀，备用。 40%氢氧化钠：称取40gNaOH，蒸馏水溶解定容至100mL容量瓶中，摇匀，备用。 2%硼酸：称取2g硼酸，蒸馏水溶解定容至100mL容量瓶中，摇匀，备用。 - 1- 盐酸标准溶液（0.01mol/L）：吸取浓盐酸0.85ml，定容至1000ml，摇匀。并按GB/T5009.12003 附录B 的方法进行标定。 混合指示剂： 2g/L 甲基红乙醇溶液：称取0.2g 甲基红溶于100mL 乙醇中。 1g/L次甲基蓝指示剂：称取0.1g次甲基蓝溶于乙醇溶液，并定容至100mL容量瓶中。 甲基红指示剂 （2g/L），次甲基蓝指示剂 （1g/L），临时用将上述两种指示剂等量混合。 2.1.2 仪器 半微量定氮装置 微量滴定管：最小分度0.01ml 2.1.3 实验步骤 样液的制备：将样品除去脂肪、骨头及筋腱后，切碎搅匀，称取10g于锥形瓶中，加 100ml 水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液置于冰箱中备用。 蒸馏：预先将盛有10ml吸收液并加有5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下 端插入锥形瓶内吸收的液面下，精密吸取5ml上述样品滤液于蒸馏器反应室内，加5ml 1%氧 化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸汽出 口管，由冷并行管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min即停止。 滴定：吸收液用0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。同时 做试剂空白试验。 计算： 14c(V-V ) X 0 100 m 5/100 -2 - 其中： X样品中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克 （mg/100g）； V样品滤液消耗的标准滴定酸的体积，单位为毫升 （ml）； V空白样品消耗的标准滴定酸的体积，单位为毫升 （ml）；0 C盐酸标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升 （mol/L）； 14与1.00ml盐酸标准滴定溶液 （1.00mol/L）相当的氮的质量，单位为毫克 （mg）； m取样质量，单位为克 （g）。 计算结果保留3位有效数字。 2.1.4 讨论 碱溶液的选择 目前挥发性盐基氮的测定多用于水产品、动物肉和动物源性饲料中。而食品和动物源性 饲料多用1%氧化镁混悬液。氧化镁的作用一个是提供碱性环境，另外一个就是可以起到消泡 剂的作用。使用氧化镁生成的氢氧化镁溶解度很小，可以是防止速度过快，以防止产生的氨 气过快而导致吸收不完全。氧化镁是弱碱,在它的作用下,只有铵类物质才会生成氨被游离出 来，从而被蒸汽带出，被硼酸吸收氢氧化钠是强碱，会使蛋白质发生水解,释放出胺类物质, 使得测定结果大大高于实际值。参照标准SC/T3032-2007的方法，在水产品的行标中是使用 氢氧化钠作为碱性溶液，但总体来讲，水产品比肉制品更容易腐败，切含量比肉制品大，而 且挥发性盐基氮在水产品中的存在方式可能与肉制品略有不同，因此水产品中推荐使用氢氧 化钠。 指示剂的选择 标准方法中选用的是甲基红次甲基蓝混合指示剂，终点颜色由蓝色变蓝紫色。实践证明 人肉眼对这种颜色变化不太敏感，终点不易掌握，误差较大。而如果改用与之反应相同的微 量凯氏定氮法中的甲基