PGC-1α辅助激活人PEPCK基因转录.pdfVIP

第32卷 第2期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1．32 No．2 2011年 3月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mar． 2Ol1 PGC．1o【辅助激活人PEPCK基因转录 何圣清 ，陈燕铭 ，王曼曼，舒 同，梁 华 ，任琢琢 ，曾龙驿 ，翁建平 (中山大学附属第三医院内分泌科 ，广东 广州 510630) 摘 要：【目的】构建人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子荧光素酶报告质粒PGL3一hPCK—luc，并探讨过氧化 物酶体增殖物活化受体 ^y辅助激活因子 la(PGC．1ot)在转录因子肝细胞核因子4d(HNF4ot)介导下对人 PEPCK基因启动子 活性的影响。 【方法】从人全血基因组DNA中克隆PEPCK启动子基因片段，并重组进荧光素酶报告载体 PGL3一hasic，将 pcDNA3．1一PGC．1ot、pcDNA3．0一HNF4ot表达质粒与PGL3一hPCK—luc按不同组合共转染进人肝癌细胞株 HepG2细胞或正常人 肝细胞株 LO2细胞，培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。 【结果】通过酶切鉴定及测序证明扩增的人PEPCK启动 子片段成功插人载体质粒中。转染后人 PEPCK启动子基因荧光素酶活性较空白对照组增加60倍 (尸0．05)：共转染质粒进 HepG2细胞或LO2细胞后 ，HNF4c~均可以增强人 PEPCK启动子基因荧光素酶活性，在HepG2细胞 ，荧光素酶活性是对照组 的2．69倍 (P0．05)，而在 LO2细胞 中，荧光素酶活性是对照组的3．64倍 (P0．05)；PGC—lot可以明显增强 HNF4ot对人 PEPCK启动子的激活作用 ，在 HepG2细胞，荧光素酶活性是PGL3一HPCK—luc+HNF4ot组的2．01倍 (P0．05)，而在 LO2细胞 中，荧光素酶活性是PGL3一HPCK—luc+HNF4c~组的 2．82倍 (P0．05)。而与单一转染组相 比，共转染 peDNA3．1一PGC一10【与 pcDNA3．0一HNF4ot显著增加了PEPCK的mRNA和蛋白表达水平(P0．05) 【结论】人PEPCK启动子基因报告质粒成功构 建 ，且转录因子HNF4a可以激活人PEPCK启动子活性，辅助激活因子PGC—lot可以进一步加强HNF4a的作用。 关键词：糖异生 ：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 ：过氧化物酶体增殖物辅助激活因子 1；基因表达调控 中图分类号：R587．1 文献标志码：A 文章编号 ：1672—3554(2011)02—0191—06 PGC-10【CoactivatesHumanPEPCK GeneTranscription HESheng—qing，CHENYan-uring ，WANGMan—man，SHUJiong，L1ANGHua，RENZhuo—zhuo， ZENGLong-yi，WENGJian—ping (DepartmentofEndocrinology，TheThirdAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510630，China) Abstract：O【bjective】Thepurposeofthisstudywastoconstructthehumanphosphoenolpyruvatecarboxykinase (PEPCK) promoterlueiferasereporterplasmidPGL3一hPCK—luc， andinvestigatetheeffectoftheeoactivatorperoxisomeproliferator—activated receptor--gammacoaetivator--lot(PGC--lot)onhumanPEPCKpromoteractivityinthepresenceoftranscriptionfactorhepatocytenuclear fac