PHLPP1在结直肠癌中的表达及意义.pdfVIP

· 1974- 广东医学 2016年 7月第 37卷第 13期 GuangdongMedicalJournalJu1．2016，Vo1．37．No．13 PHLPP1在结直肠癌中的表达及意义木 何柳青，李婷婷，王姝阳，丁彦青，廖雯婷 南方医科大学基础医学院病理学系(广州510515) 【摘要】 目的 探讨PHLPP1在结直肠癌中的表达规律及临床意义 。方法 采用免疫组织化学实验检测 1O例结直肠癌组织石蜡标本中PHLPP1蛋白水平的表达情况；同时运用westernblot实验和实时荧光定量PCR实 验检测 10对新鲜结直肠癌组织及配对的癌旁组织中PHLPP1蛋 白和mRNA的表达情况；另外运用实时荧光定量 PCR实验检测52例新鲜结直肠癌组织中PHLPP1mRNA的表达水平，并分析 PHLPP1的表达水平与临床病理参 数之间的关系。结果 westernblot实验、免疫组织化学实验及实时荧光定量PCR实验的结果显示PHLPP1在结 直肠癌组织中的表达水平均明显低于配对的癌旁组织，并且 PHLPP1在结直肠癌组织中mRNA的表达水平与结 直肠癌的分化程度、Ducks分期、淋巴结转移和远处转移相关等临床病理参数之间呈负相关(P0．05)。结论 结 直肠癌组织中PHLPP1的表达水平显著下调 ，并且其表达水平与分化程度、Dukes分期、淋巴结转移和远处转移 等临床病理参数之间呈负相关，PHLPP1在结直肠癌的发生、发展和转移的过程 中可能发挥类似抑癌基 因的 作用 。 【关键词】 结直肠癌；PHLPP1；临床意义；抑癌基因 结直肠癌是常见的胃肠道恶性肿瘤，其发病率和 癌 27例，结肠癌 25例；肿瘤分化程度 ：低分化腺癌 7 病死率居全球所有恶性肿瘤的第3位和第 4位 ，但是 例 ，中分化腺癌27例 ，高分化腺癌 18例；Ducks分期 ： 目前关于结直肠癌的具体发病机制仍未明确。PHPPL A期 13例，B期 l6例，c期 18例，D期5例。 (PleckstrinHomologyDomainLeucine—richiRepeatPro— 1．2 方 法 teinPhosphatases)是 Gao等…在2005年首次在人体内 1．2．1 试剂 0．25％胰酶、胎牛血清、DMEM、1640培 发现 的。PHPPL基 因包括 PHLPP1ol、PHLPP1B和 养基均购 自美国Gibco公司；细胞培养瓶、细胞培养皿 PHLPP2，PHLPP蛋白属于蛋 白磷酸酶家族。在结构 均购 自美国Coming公司；Trizol购 自Invitrogen公司， 上，PHLPPI有一个PH结构域 (PH)，一个富含亮氨酸 逆转录试剂盒及 SYBRPremixExTaq 试剂盒购 自 重复的区域 (LRR)，一个 aPP2C磷酸酶结构域 (PP2C) TaKaRa公司；兔抗人 PHLPP1抗体购 自Abcam公司； 和一个羧基端 的PDZ配基 ¨ ，其 c端含有稳定的 PVDF膜购 自Millipor公司；免疫组化试剂盒sP一9000 CAG重复单元 。研究发现，PHLPP1在乳腺癌、卵巢 和DAB显色剂均购 自北京中杉金桥公司。 癌、肾母细胞瘤 、前列腺癌、肝细胞癌、恶性胶质瘤 、胰 1．2．2 Westernblot实验 将收集好的蛋白用 10．5％ 腺癌和 白血病等多种肿瘤 中扮演着抑癌基 因的角 SDS—PAGE凝胶进行电泳分离 ，用湿转法将凝胶中的 色 。但在结直肠癌中，鲜有关于PHLPP1的报道。 蛋白转印至0．45cm的PVDF膜上。转膜结束后，将膜 因此 ，本研究重点讨论 PHLPP1在结直肠癌中的表达 置于5％脱脂奶粉中封闭1h，加入兔抗人的PHLPP1 情况及l临床意义。 多克隆抗体 (稀释比例为 1：500)置于4℃冰箱孵育过 1 资料与方法 夜。1×TBST洗膜 3次 ，15min／次，加入二抗，于室温 1．1 一般资料 收集南方医科大学南方医院 10例结 孵育45min，1×TBST洗膜3次，15min／次，将未结合 直肠癌石蜡标本和52例结直肠癌新鲜标本 ，包括肿瘤 的抗体