Prohibitin蛋白与卵巢癌紫杉醇耐药相关性的初步研究.pdfVIP

， 刍 2。 (12) 一csu…rgjh即：Ilxbyx一-net Prohibitin蛋白与卵巢癌紫杉醇耐药相关性的初步研究 唐娟 ，曹兰琴 ，易红。，汤参娥 (中南大学湘雅医院 1．妇产科；2．卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室 ，长沙410008) 【摘要 】目的：研究转染pshRNA／prohibitin(PHB)的RNA干扰对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的生物学特性的影响。 方法：采用Western印迹及实时PCR方法验证卵巢癌紫杉醇耐药细胞株 (SKOV3／Taxo1．25)和敏感细胞株 (SKOV3)中 PHB蛋白与mRNA的表达差异。以脂质体Lipofectamine2000为载体，将针对PHB基因设计的带有荧光蛋白的三靶特 异性小发夹RNA干扰片段，即pshRNA／PHB42(PHB1实验组)、pshRNA／PHB24。(PHB2实验组)、pshRNA／PHBI36(PHB3 实验组 )瞬时转染耐药细胞株，另设阴性对照组。转染48h后，用Western印迹及实时PCR方法检测PHB蛋白与 mRNA的表达情况，筛选出沉默效果明显的两个片段 (PHB1及PHB3)为实验组 ，与阴性对照组进行后续实验。用 MIT及流式细胞术检测实验组及对照组的细胞增殖、紫杉醇Ic 及凋亡情况。结果：耐药细胞株中PHB蛋白相对表 达量及mRNA相对表达量 (2△C)明显高于敏感细胞株 (P0．0s)。PHB1和PHB3实验组的蛋白相对表达量及mRNA 相对表达量 (2△c)较阴性对照组明显降低 (P0．0S)。转染48h及72h后 PHB1及PHB3实验组细胞的增殖较阴性对 照组明显减慢 (P0．05)；干扰后72h各实验组紫杉醇Ic卯较干扰前明显下降 (P0．05)；转染48h后PHB1及PHB3实 验组细胞凋亡率较阴性对照组明显增加 (P0．0s)。结论：针对PHB合成的shRNA能有效抑制耐药细胞株中PHB基 因表达，沉默PHB基因后耐药细胞株的细胞增殖能力下降，凋亡率增加，对紫杉醇敏感性增加，提示PHB与卵巢癌 紫杉醇耐药相关，干扰PHB基因的表达可能降低卵巢癌紫杉醇耐药性。 [关键词】RNA干扰；卵巢癌；prohibitin；紫杉醇耐药 DOI：10．3969／j．issn．1672—7347．2012．12．007 Prelim inarystudyoftheprohibitinproteinandpaclitaxel resistanceinovariancancer TANGJuanJCAOLanqin，YIHong2,TANGCane DepartmentofGynecologyandObstetrics；2．KeyLaboratoryofCancerProteomicsofChineseMinistryofHealth,XiangyaHospital, CentralSouthUniversity,Changsha410008,China) ABSTRACT Objective：TodeterminetheeffectofRNAinterferencewithtransferredpshRNA／PHBonthe biologicalcharacteristicsofpaclitaxe1．resistantovariancancercelllines． M ethods：W esternblotandrea1time．PCRwereusedtoassaytheexpressionofPHBprotein andmRNAinSKOV3／Taxol一25andSKOV3cell1ines．TheSKOV3／Taxol一25celllineswere transientlytransfectedby3target—specificsmallhairpinRNA(shRNA)interferencefragments