用Red-ET重组酶构建基因打靶载体.pdfVIP

22 卷 6 期 生 物 工 程 学 报 Vo1．22 No．6 2006年 11月 ChineseJournalofBiotechnology Noventber 2oo6 用 Red／ET重组酶构建基 因打靶载体 New Option for Gene--targetingVector Construction Red／ET Recombination 杨建岭 ，顾淑萍 ，陈 臣 ，王铸钢 ，许 燕 ，费 俭 YANG Jian—Ling ，GU Shu—Ping ，CHEN Chen ，WANG Zhu—Gang ，XU Yan andFEIJian 1上海师范大学生命与环境科学学院，上海 200234 2上海南方模式生物研究 中心 ，上海 201203 lDepartmentof andEvironmentSciences，ShanghaiNormalUniversity，Shanghai，China 2Shanghai冗 eⅡrc^CenterforBix)modelOrganism．Shanghai．China 摘 要 基 因敲 除的小鼠模型是研 究基 因功 能的一种 重要 资源。采用常规分子克 隆的方法建立基 因敲 除的打靶 载体存在 构 建效率低和 难以获得 长片段 同源臂 的缺 点。因此快速 高效地构建打靶载体 ，已成为获得 特定基 因敲除动 物模 型的关键 环 节。 为研 究 Respl8未知功 能分泌肽基 因，应用一种 新的 DNA工程 平 台—— Red／ET同源重组技 术 来构 建其打靶载 体，并 比较 了这 一 方法在构建不同长度 同源臂 中的效率。研 究表 明，Red／ET重组方法构建打靶载体具有很高的效率 ，可以获得较长 的同源 臂 ，并且不会 引入突变 ，有助于获得更高的打靶效率。因此Red／ET重组为构建打靶载体提供 了一种新 的可靠的方法 。 关键词 Red／ET重组 ，基 因打靶 ，载体 中图分类号 Q782 文献标识码 A 文章编号 1000—3061(2006)06—0919—06 Abstract Thestudyofhuman new gene’sfunctionhasbecomean nicreasinglyactiveacademicfieldbasicallyrelyingonthe geneknockout(KO)mouse．Theconstructionoftargetingvectoreconomicallyandefficientlyhasturnedintothekeystepto acquireaKO mousebecauseofthelow efficiencyofrecombinationwithtraditionalconsturctedtargetingvector．Forstudyofthe functionofnew gene—Resp18，we broughtin a new DNA engineering platform—Red／ET recombination to construct Resp18 targetingvector、Red／ETrecombineeringdiffersfromtheconventionalwaysofvectorconsturction(e．g．PCR，restrictionenzyme digestionandligation)andachievesgeneticmodificationbyacquisition，insertion，fusionorreplacementofthetargetgene throughsmallfragmentsmediatedhomologousrecombination．Now Resp18 targetingvectorsofthree strategieswereyielded successfullythrough two homologous recombination pmcesses ofretrieve and n0一targeting ． R