RNA干扰技术抑制人肝癌细胞POLD1基因表达的研究.pdfVIP

广西医学 2014年5月第36卷第5期 549 RNA干扰技术抑制人肝癌细胞 POLD1基因表达的研究▲ 吴 琼 黄文涛 黄 怡 廖柳凤 谭晓红 徐 恒 (1广西医科大学附属肿瘤医院药学科，南宁市 530021，E—mail：wuqiongl919@163．com； 2广西医科大学研究生学院，南宁市 530021) 【摘要】 目的 应用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞SMMC-7721中POLD1基因的表达，探索该技术干预肝 癌的可行性。方法 制备4个针对人 POLD1基因的shRNA表达质粒，转染SMMC-7721细胞48h后，荧光定量 PCR法检测POLD1基因的表达，CCK一8检测细胞生长情况。结果 测序鉴定证实4个 shRNA表达质粒构建成 功，将其转染SMMC-7721细胞后，NEO—POLD1—1和NEO—POLD1-4表达质粒抑制效果明显，使 SMMC-7721细胞的 增殖受到抑制，并且使 POLD1基因表达在 mRNA水平抑制，NEO—POLD1—1相对表达量为(0．1425±0．0205)， NEO—POLD1-4相对表达量为 (0．209±0．009)。结论 针对POLD1基因设计的shRNA在体外有效地抑制了 POLD1基因mRNA的表达和肝癌细胞的增殖，且实现RNA干扰具有序列选择性。 【关键词】 肝肿瘤；POLD1基因；RNA干扰技术 【中图分类号】 R735．7 【文献标识码】 A 【文章编号】 0253—4304(2014)05．0549—03 DoI：10．11675／j．issn．0253—4340．2014．05．01 InhibitionofPOLD1GeneExpressionbyRNA InterferinginHumanLiverCancerCells wuQiong，HUANGWen—tao，HUANGYi，LIAOLiu-feng，TANXiao．hong，XUIteng。 (1DepartmentofPharma．y，AffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUnive~ity，Nanning530021，China； 2GraduateSchoolofGuangxiMedcialUnive~ity，Nanning530021，China) 【Abstract】 Objective ToinvestigatethefeasibilityofRNAinterfering(RNAi)onlivercancerbyusinghtis techniquetoinhibittheexpressionofPOLD1geneinhumanlivercancerceHsSMMC-7721．Methods Fourexpression plasmidswithshRNAstargetingPOLD1genewereconstructed，andthenhteplasmidsweretrnasfectedtoSMMC-7721for 48hours．Theexpression ofPOLD1genewasdetectedbyreal—timeRT—PCR．CCK-8assaywasused toanalyzethe changeofcellproliferation．Results The four expression plasmidswere constructed successfully，confirmed by sequencing．Aftertheplasmidsweretrnasfected to SMMC-7721，htecellproliferationWas significantly inhibited in NEO—POLD1—1andNEO—POLD1-4．Th emRNA expression ofPOLD1gene inNEO—POLD1-1na dNEO—POLD1—4 weresignificantlyinhibitedas (O．1425±0．0205)and(0．2094-0．009)．Condusion shRNAstargetinghte