转化生长因子β1在肠易激综合征大鼠模型中表达的研究.docVIP

　　转化生长因子β1在肠易激综合征大鼠模型中表达的研究 ：安钰，罗志飞，翁阳，孙晓宁 【摘要】 目的：观察转化生长因子(TGF)β1在肠易激综合征(IBS)大鼠模型肠粘膜组织中的表达，初步探讨TGFβ1在IBS发病机制中的作用。方法：采用乙酸灌肠加束缚应激和单纯束缚应激方法制造IBS动物模型(IBS1、IBS2组 )，同时设立灌肠对照和正常对照组，行内脏敏感性评价后，用免疫组化的方法检测TGFβ1在IBS大鼠模型组和对照组肠粘膜组织中的表达情况。结果：IBS1、IBS2两模型组大鼠腹外斜肌收缩次数在不同扩张容量下均较正常对照组明显增加(Plt;0.05～0.01)，组织学分析显示各组大鼠均无明显的炎症性表现。TGFβ1在各组肠粘膜组织均有表达，各组之间的差异无统计学意义(Pgt;0.05)。结论：TGFβ1作为一个抗炎性细胞因子在IBS发病机制中可能通过非直接的方式发挥作用。 【关键词】 转化生长因子β1;肠易激综合征;大鼠模型;免疫组化 　　[ABSTRACT] Objective: To observe the expression of transforming groodel e and investigate the effect of TGFβ1on antiinflammatory cytokine. Methods:Rats model of IBS by intracolonic instillation of acid and restraint stess and single restraint stess methords, munohistochemistry. Results:The contraction frequency of the abdominal muscle in todel groups mation in the rats of each group. The expression of TGFβ1different position of each group ay be an important regulatory factor in IBS matory cytokine by indirect means. 　　[KEY 6280C型多道生理信号采集处理系统和针型插入型电极均由成都仪器厂提供，8F导尿管(直径2 mm，球囊最大容量3 mL，最大直径2 cm)用作结直肠内球囊扩张导管(浙江康康医疗器械有限公司生产)。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 大鼠模型制备 IBS1组：实验前24 h禁食不禁水，乙醚麻醉后经肛门插入连接注射器的硅胶管(距肛门8 cm)，结肠内灌入40 mL/L的乙酸1 mL，缓慢拔出硅胶管，用手压迫肛门并将大鼠尾部抬高30 s，后用0.01 mol/L 的PBS 1mL冲洗结肠，放回笼中自由活动进食水，于第7天行束缚应激，将大鼠置于一限制起肢体活动但不影响其呼吸的特制透明圆柱形筒内，3 h后将大鼠放入饲养笼中[5];灌肠对照组：用生理盐水1mL代替乙酸灌肠，其余方法相同;IBS2组：按照s方法[6]略作修改，束缚前禁食24 h不禁水，乙醚麻醉后，用宽胶带束缚前肩、前上肢及胸部，限制前上肢搔抓头面部，但不限制其活动，束缚时间为1 h(自大鼠清醒后开始计时);正常对照组：不做任何处理。 　　1.2.2 腹壁肌电活动 记录腹壁肌电活动评估肠道敏感性[7]：大鼠实验前24 h禁食不禁水，3%戊巴比妥钠腹腔注射(1 mL/kg)麻醉下，将涂石蜡油的带气囊的8F导尿管插入结肠内(使气囊末端插入肛门内7.0 cm,在肛门外1.0 cm处将其固定在大鼠尾根部)后，大鼠固定在手术台上，将银丝双极电极插入腹股沟韧带上方、距中线1.5 cm一侧腹外斜肌上，待大鼠适应30 min后，每只大鼠给予球囊扩张3次，容量分别为1.0、1.5、2.0 mL，每次扩张持续5min，间隔30 s(以防肠道缺血)，记录5 min内腹外斜肌的收缩次数。肌电活动增高超过基线水平100 μV以上为一次有意义的腹部收缩活动。 　　1.2.3 组织形态学检查 肌电活动测定结束后，给予过量的麻醉药将大鼠处死，分别取横结肠、降结肠及直肠组织各一块，10%的中性福尔马林固定，显微镜下观察肠粘膜病理组织学改变。 　　1.2.4 TGFβ1免疫组化检测 常规脱腊至水化，3% 的H2O210 min，蒸馏水洗3次各3 min，微波加热抗原修复10 min，一抗(1∶100)，4 ℃过夜，室温下复温30 min，加兔抗大鼠IgG抗体HRP多聚体，37 ℃ 30 min(以上每步后用 PBS洗3次，每次3 min)，DAB显色(镜下控制显色时间)，后经苏木素复染，脱水透明、