6 植物细胞培养与次生产物生产4.pptVIP

第一节 悬浮培养(suspension culture) 悬浮培养：细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 液体状态下便于细胞和营养物质的充分接触和交换，细胞状态可以相对保持一致，因此有利于在细胞水平上进行各种遗传操作、生理生化活动的研究，同时为植物细胞的大规模培养提供了技术基础。 悬浮培养必须获得大量细胞。早期多采用叶肉细胞和根尖细胞作为细胞来源。现在多采用愈伤组织作为起始细胞来源。 悬浮培养与固体培养比较有三个优点： 一是增加培养细胞与培养液的接触面，改善营养供应； 二是在振荡条件下可避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而对细胞自身产生毒害； 三是振荡培养可以适当改善气体的交换。 一. 愈伤组织诱导 愈伤组织的要求：松散性好、增殖快、再生能力强。其外观一般是色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状，疏松易碎。 ?选择适宜的外植体：幼胚、胚轴、子叶是最常使用的外植体。优点：细胞生活能力强，增殖速度快，组织分化与器官再生能力强； 选择适宜的培养基：较高浓度激素和水解酪蛋白、脯氨酸、谷氨酰胺等；必要的附加物质对建立松散性好的愈伤组织有利。 愈伤组织的培养阶段必须进行必要的选择和继代，以获得均匀一致的疏松性。 悬浮系的建立与继代培养： 开始进行悬浮培养时，先取一定量的愈伤组织放入盛有液体培养基（30或70ml）的三角瓶(150或250ml)中