培养基的质量控制及质量保证-张建江.pptVIP

第二部分:培养基的质量控制及质量保证 * * 培养基:在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。根据ISO提出的定义，培养基是以固体、半固体、液体形式，包含天然或合成成份，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。 一 有关术语 目前来讲，在微生物检验领域尤其是食品微生物的检验，还主要是应用培养基对微生物进行培养、分离和生化鉴定，即就是目前较为先进的利用基因特征进行检测的技术，最终也要通过培养基技术来进行最后的确定，因此应用培养基的方法被称为“金标准”。 培养基的种类很多，使用的原料也各有差异。 从营养角度分析，任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水。 另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 培养基主要成份 蛋白胨 琼脂 肉浸汁 糖醇类 水分 其他 无机盐类 化 学 成 份 天然培养基 (complex medium) 合成培养基 (defined medium) 半合成培养基 (semi-defined medium) 二 培养基的分类 物 理 状 态 液体培养基 (liquid medium) 固体培养基 (solid medium) 半固体培养基 (semi-solid medium) 固体培养基 固体培养基上生长的菌落 半固体培养基 液体培养基 用 途 选择培养基 (selected medium) 增殖培养基 鉴别培养基 (differential medium) 鉴别培养基：能够进行一项或多项微生物生理学和生化特性鉴定试验的培养基。 伊红和美蓝二种苯胺染料可抑制G+细菌和一些难培养的G-细菌。在低酸度时，这二种染料结合形成沉淀，起着产酸指示剂的作用。试样中的多种肠道菌会在EMB培养基上产生相互易区分的特征菌落，因而易于辨认。例如大肠杆菌强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体呈酸性，菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。 根据培养基的营养成分是否“完全”，可以分为基本培养基、完全培养基和补充培养基，这类术语主要是用在微生物遗传学中。根据培养基用于生产的目的来区分，可以分为种子培养基和发酵培养基。专门用于培养病毒等寄生微生物的活组织培养基，如鸡胚等；还有专门用于培养自养微生物的无机盐培养基等。 三 培养基质量控制 制备培养基的一般程序：称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。 1.玻璃器皿的清洗 用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。 2.培养基配方的选定: 　　 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。 培养基的制备记录 　　 每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取: 　　 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。 4. 培养基各成份的混合和溶化: 　　 培养基所用化学药品均应是化学纯的。 使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。 　　 在锅中