实验三-抗体形成细胞能力的检测——QHS和第3次免疫.pptVIP

实验三 体外检测细胞产生抗体的能力 ——QHS法第三次免疫  Complement-binding site Fab段 Fc段 C1q 结合位点被屏障 结合抗原之前 CH1 CH2 暴露的C1q结合位点 结合抗原之后 IgM CH3区，IgG CH2区 抗原+抗体 结合补体 抗原+抗体+补体 补体活化，形成MAC 靶细胞裂解 ( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination ) 定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力 1. 原理： 抗原 SRBC 免疫小鼠 4 days later 浆细胞 IgM + SRBC 补体 分光光度计定量分析 Hb Hb Hb 脾脏 2. 材料： SRBC免疫小鼠 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) 经SRBC吸收的补体溶液 来自豚鼠血清 经SRBC吸收去除非特异性抗体 3. 方法： 取脾，以Hank’s 液漂洗 经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液 收集细胞悬液，加适量Hank’s 洗涤 离心1500rpm, 5min 1） 制备脾细胞 弃上清 细胞沉淀中加入4.5ml蒸馏水，用力混匀 40s 迅速加入0.5ml 9%NaCl 离心 1500rpm, 5min 弃上清，加入1.2m