1-功能化软骨组织构件中力对软骨细胞时空影响的机理研究.docVIP

功能化软骨组织构建中力对细胞时、空影响的机理研究 软骨组织工程修复软骨缺损时力对细胞时、空影响的机理研究 （一）立项依据与研究内容： 项目的立项依据 关节软骨损伤是外科常见的疾病之一，通常由外伤、手术切除、骨性关节炎等慢性疾病引起，可导致关节软骨损伤，关节面不完整。临床表现为顽固性疼痛，关节活动障碍。严重者可完全丧失关节功能，成为肢残和劳动力丧失的主要原因之一。 大量研究结果表明，关节软骨由于没有血供，且软骨细胞又包埋于稠厚的细胞外基质中软骨组织再生能力极为有限，软骨缺损直径〈3mm 时，一般能有良好的软骨再生修复，如缺损直径 〉3mm时，则用“关节钻孔”“微骨折”等方法治疗软骨缺损，其机制是将血供和骨髓基质干细胞带入缺损处，这种方法短期内取得了较好的效果，但3-5年后满意较低，因为这种做法只能形成纤维性软骨、纤维组织及少量的透明软骨。再生组织与正常组织相比，在生化组成和力学性能上均存在较大差异，而且修复不久即发生退化，并有钙化、骨化倾向，最终形成继发性骨关节炎。 现在，临床上把修复软骨缺损的目标更多的集中到软骨组织工程。软骨组织工程的基本方法是将自体或异体细胞经体外培养、扩增后，接种到一种组织相容性好、可降解吸收的生物材料上，形成细胞—生物材料复合物后，将细胞—生物材料植入体内组织缺损部位，生物材料逐渐被降解吸收，而细胞就形成了新的有功能的组织，达到修复组织或器官缺损的目的。目前把软骨细胞、有向软骨细胞分化潜能的细胞与不同支架材料复合，进行体内构建、体外构建等都取得了巨大的进展。在这软骨组织工程快速发展中培养软骨的生物反应器也随之被开发。除现在静态培养也被采用外，通常采用的主要有三种：旋转培养瓶、旋转壁式生物反应器和组织灌注培养系统（见图）。 这三类种骨组织工程化构建的生物反应器都显示了比静态培养细胞增殖更快，合成更多的GAG（氨基葡聚糖）、胶原及蛋白多糖等细胞因子等。当然，也有其它形式的加载方式，宋锦磷等采用静张应力对大鼠髁突软骨细胞增殖效应进行研究，实验表明细胞增殖数量随静张应力生高(5 kPa-10 kPa)而升高。国内------------这些加载方法与真正软骨受动态直接压载是不同的。 Mauck等[1]将把软骨细胞接种在琼脂糖凝胶进行正弦动态直接施压，载荷大小是使细胞材料块变形10％，频率为1Hz，4周后发现GAG（氨基葡聚糖）升高45%，胶原含量增加37%，明显高于未加载组。Buschmann等施加1Hz，应变3%的动态压载荷进行软骨构建，实验表明[35S] 硫酸软骨素增加15%-25%,脯氨酸增加10%-25%。Darling等和HUNG等人认为动态直接施压可能是软骨组织工程合适的力学环境。Kuo CK等2006年回顾软骨组织工程的发展时也强调了这种加载方法的重要性。 以上研究都是对细胞水平细胞结构、细胞功能的关注，只是重视软骨细胞如何达到与活体软骨细胞的生物学状态，而构建的软骨组织的力学功能没受到重视。当前，功能化软骨组织的构建研究较少[]，力学因素对软骨组织工程构建的机理研究就更少见。 为了说明力学因素对软骨组织工程构建机理研究的必要性。回顾一下临床上力对软骨细胞时、空影响的现象。体外培养的组织工程软骨，植入缺损区后不能迁移到交界处形成“桥接”，而出现“缝隙”，不能完全融合为一体，这对软骨缺损修复同样产生不利影响，新生软骨将逐渐松脱和退化。Wayne 对软骨修复区及临近的正常软骨组织进行了生物力学研究，结果发现，在相同的压力作用下，软骨修复组织在垂直轴向上比临近的正常软骨组织交界处产生较大的应力，这种不良应力是产生交界处“缝隙”及缺损修复不能愈合的原因。另外缺损修复形成纤维性软骨、纤维组织及透明软骨少，钙化、骨化倾向也时有发生。上述现象表明软骨修复问题与力学因素息息相关，力学因素对功能化软骨组织构建的重要性，功能化构建的软骨组织会减少应力集中；即使有少量应力集中，功能化构建的软骨组织也能更好的适应在体环境。从活体软骨的力学作用看，因此对力学环境在其中的整合的重要作用进行研究。这涉及到体外培养的组织工程软骨植入缺损区更好得愈合，也包括促进功能化构建的软骨组织构建技术的提高。这方面的研究对于软骨组织工程的成熟发展是急需解决的。 因此，本项目确定为功能化软骨组织构建中力对细胞时、空影响的机理研究。通过模拟活体软骨损伤植入修复的形式。建立带有力学环境的体外修复模型，施加正常生理载荷进行研究。 这里我们回顾一下力学环境对软骨的重要性，更能理解我们建立活体软骨损伤植入修复的体外修复模型，给以正常生理的力学环境进行研究的意义 软骨覆盖在关节的表面，主要功能是承传骨骼的负荷，减少冲击、振动。每种组织都有特定的力学环境，关节软骨的表观载荷主要是压应力。中等速度的行走时人膝关节、髋关节受力为体重的6-8倍[]，在一个健康人中