分析方法标准化程序090415.docVIP

分析检测方法标准化程序 一、 确定标准化分析方法的目标和范围 根据测定组分的目标和范围，查阅国内外相关文献， 通过对文献的理解初步确定分析方法；分析方法的选择要综合考虑多方面的因素（1）分析对象是什么（2）样品基体是什么?（3）分析对象的浓度范围（4）定性和定量要求（5）检出限和定量限是多少（6）样品或被分析物稳定是否稳定（7）设备和仪器试剂通用性药品及等（8） 标品及试剂的稳定性。 二、建立分析方法的基本要求 1、标准物质的要求：（1）常量分析中（大于0.1 ％）标准纯度要求接近100 ％ ；在微量、痕量及超痕量分析中（0.1 ％至ug/g以下）标准纯度至少应为95 ％。稀有的或贵重的纯物质标准的建立，一般通过测量其在特定溶剂中的吸光度的方法，且分析过程不应有明显干扰。 （2）如果标准参考物与分析物质间转化因子不同，应该通过光谱或色谱（峰高、面积）计算它们的不确定度。（3）如果标准物容易吸潮使用前应该在100度烘箱中干燥，如果标准物质比较稳定，放入干燥器中储藏 2、方法适用范围的要求 （1）建立的分析方法适用于单一基质，至少使用3种典型的标样，如不同属性（外观，成熟度，品种，时期）在不同时间进行回收率重复性测定，（2）分析方法适应用于一类物质如水果、谷物、油脂等在分析范围内选择具有代表性的物品进行回收率重复性测定。（3）分析方法适应用于一般“食物”，应从食物三角(Sullivan, D.M. and Carpenter, D.E. (1993) “Methods of Analysis for Nutrition Labeling” AOAC International, Gaithersburg MD 20877, pp. 115-120)中选择具有代表性的物质。如残留物，基质一般分为几类，如“脂肪性食物”和“非脂肪性食物”选择能代表实际物质组成合性质的物质才能适应实际分析。在不同时间进行回收率重复性测定，测定结果应有明显差别具体要求见表： 三、 预实验的方法 1 、 预实验的方法 （1） 标样和试剂的配制 表1 标准溶液配制 标准的名称 标样的配制方法 标样的介质 标样的浓度 配制日期 有效日期 （2）色谱参数的初步优化 选择合适的色谱柱，配制混标溶液进样，根据文献资料的保留时间、紫外吸收（液相）结合空白样品，2个不同浓度的单标溶液，进行色谱峰的确认，改变流动相比例及溶剂（气相改变升温程序）进行色谱条件的优化）。 （3）样品前处理方法研究 按照实验设计的方案，进行样品（2个）及样品加标（样品的含量50%，及样品含量100%）实验，以样品的加标回收率和重复性，对前处理方法的进行研究和评价 表 2 样品的加标预实验 序号 组分名称 标样的含量 样品加标后含量 回收率（%） 三、 分析方法测定条件的研究 1、分析条件的优化： 重点优化的内容：减少运行时间，提高分辨率，改善峰形，提高提取效率，分离度（分离度要求大于1.5，至少大于1.0），选择性，稳定性，在典型的合适储存条件下对分析物的稳定性进行了测试。 2、线性范围、线性方程及相关系数测定 根据仪器的响应值结合样品的含量，配制6~8个标准溶液梯度（包括分析的浓度范围），进行标准曲线的绘制，测定结果以峰面积y对浓度x(mg/L)进行回归处理，计算线性回归方程。相关系数大于0.99 表3 标准曲线线性方程及相关系数 序号 组分名称 线性范围 线性方程 相关系数 1 2、样品加标回收率 回收率测定每种基质需要最少涵盖分析范围的3种浓度样品，每个加入浓度至少独立重复测量10次，于不同时间独立测定。选择加入样品的含量25%，50%，100%，200%（在分析物的测定范围内） 表4 样品加标回收率及精密度实验 化合物 A B 加入量（μg/kg） 测定值 （μg/kg） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 平均测定值 （μg/kg） 平均回收率（%） 相对标准偏差RSD（%） 注：平均回收率大于110%时考虑进一步进化基质，或提高分离度，若回收率低于60-70 ％，应进改善分析方法，进一步提高回收率。AOAC规定的回收率合理范围见表5 表5 回收率合理范围 浓度 回收率 (%) 100% 98-101 10% 95-102 1% 92-10