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第一章细胞培养概述 1.体外培养: 从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的条件下， 进行孵育培养，使之生存并增殖 2.细胞培养：取得组织用机械或消化方法分散成单亇细胞悬液，然后进行培养、增殖。 [块]培养：把活体的小片组织置于底物上孵育，细胞自其周围移出并增殖 将活体的器官或器官的一部分取出，置于体外, 5.器官培养特点：器官培养中的小块组织块包含了不止一种基本组织。是由几种组织共同构成的具有器官的结构和功能特征的组织块。 培养时,其内部的细胞能按照在体内器官的正常生长发育规律继续生长，培养的器官内部结构与体内相似，保持与在体内时相似的解剖关系和功能特征。 6.器官培养的目的：在体外环境下维持器官内部的发育分化以及结构与功能特征，以便直接观察和研究器官的发育分化过程、功能表现及其影响因素。 7.细胞培养的优点：1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动；2.可控制：A可控制-选择对象：均一性、重复性；哪一种：类型：上皮？间质？；性质：正常？肿瘤？； 阶段：B可控制-调节条件：各种因素; 物理、化学、生物等因素：C可控制-利用方法：采用各种研究技术、记录方法： 研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记； 记录：摄影照片、缩时电影、电视。3.应用广：学科多：对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类，一种动物：不同年龄，不同组织，正常或异常（肿瘤--）。4.较经济：可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。 8.细胞培养的缺点 ：现人工模拟体内环境的技术已经很高, 但, 人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同. 当细胞被置于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中,久了，发生变化.与体内主要不同，缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响因此，相对孤立、相对单一，失去原有组织结构和细胞形态分化减弱或不显，细胞趋向单一化 9.提示：要正确认识体外培养细胞， 是一种特定条件下生长的细胞群体。 10.生长类型：按生长方式:2型：A 粘附型细胞:能附着在某一固相支持物表面生长的细胞。 B悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞， 只有少数细胞类型，如某些肿瘤细胞和白细胞, 可在悬浮状态下生长 11.贴附(粘附)型细胞 。粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式 含义 两方面 结果 : 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须才能 培养时：细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。 12粘附(锚定或锚着)依赖型性细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞类型细胞在体内、外的粘附方式：存在差异A体内：粘附是全方位 ,外形具有复杂的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面,外形一般与体内时明显不同 13按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 ：根据形态大致的不同，主要2类：上皮样 、成纤维细胞样 形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核。生长特点易相连成片、相靠—紧密相连—成薄层—铺石状，生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。 B成纤维细胞样细胞 ：名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的。来源：由中胚层间充质组织起源的组织。如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核。生长特点：排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。 14注意：贴附生长型--类型：1. 与体内同名的细胞不完全相同：如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源，自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但发展趋向不同。2. 培养细胞的形态不稳定条件改变，细胞形态可有变化。 15.培养细胞形态不稳定： 血清 Hela 高血清 成纤维细胞样 低血清 上皮样细胞 pH Hela 太酸或太碱 成纤维细胞样 标准pH上皮样细胞 细胞密度 3T3 低密度 成纤维细胞样 高密度 上皮样细胞 生长状态改变 悬浮或贴附 悬浮 圆形 贴附 成纤维或上皮样 转化与否 未转化 成纤维样 转化后 可成上皮样 16.注意细胞鉴定 悬浮生长型。概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮