何玲开题报告.docVIP

附件B： 毕业设计（论文）开题报告 本科毕业设计论文题目：大鼠骨髓干细胞原代分离培养及其体外培养条件的优化 课题的目的及意义（含国内外的研究现状分析或设计方案比较、选型分析等） 项目目的及意义 组织工程学是刚刚发展起来的新兴的应用学科，是利用体外培养的方法将某些具有干细胞特性的细胞诱导分化成我们所需要的组织甚至器官以供临床所需。由此我们看出，组织工程学的关键在于分化我们所需的组织的干细胞，其次是使干细胞分化为特定组织的条件。最近许多研究显示，在人类、鸟类、啮齿等生物的骨髓中可以分离出一种细胞，它具有向骨、软骨、脂肪及肌腱等组织分化的潜力，这就是骨髓间充质干细胞。 骨髓间充质干细胞具有高度自我更新和向骨髓基质细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞、成肌细胞及神经细胞在内的多种细胞分化的潜能，来源丰富、易于分离和培养，在体外可高度扩增，是细胞治疗和基因治疗的首选靶细胞。利用MSCs作为种子细胞，诱导出各种功能细胞，是解决目前组织工程中细胞来源的最有效的方法。然而MSCs体外培养生长较慢，原代培养细胞两周细胞才能融合。传代7代以后增殖变得缓慢，并有自动分化为成骨细胞的可能。体外干细胞研究需要大量的细胞，因此如何使MSCs在体外快速生长增殖，得到大量纯化的细胞就成为研究干细胞的前期首要问题。 同造血干细胞相似，由于面前尚无MSCs的特异性标志，对MSCs的特征描述及其分离方法都是以一个细胞群体的方式进行的。目前用于分离MSCs的方法主要有三种：密度梯度离心、流式细胞仪分离、贴壁筛选法。 基于此，本实验希望通过对骨髓充质干细胞的培养方面的文献的查询，设计实验方案，以期得到一种最优的实验室培养MSCs的实验条件，为后续的骨髓充质干细胞的研究实验，提供充分的研究材料，打下良好的基础。 1.2　国内外研究现状 MSCs在组织工程、细胞及基因治疗研究中有以下优势： 1.来源广泛，且取材方便，对机体无害 2.由于充质干细胞取自自体，有它诱导而来的组织再进行移植不存在组织配型及免疫排斥的问题 3.分化能力强，可在体外接受环境依赖性分化。 4.易于外源基因的转染和表达，外源基因修饰的MSCs仍具有干细胞的高度增殖和自我更新特性，在体外可被大量增殖。 但是骨髓充质细胞的研究也存在一些还未解决的问题： 1.虽然来源广泛，但是MSCs在骨髓中含量稀少，如何快速的在体外培养和扩增MSCs成为研究的关键。 2.虽然MSC分化能力强，但是在体外药物诱导的条件难以控制，定向诱导分化的条件、诱导细胞的性能、体外组织重构及重构组织等许多方面均不明了。 3.骨髓干细胞可以表达多种抗原标志且没有特异性，于是为骨髓充质干细胞的分离纯化带来困难。 由于骨髓充质细胞在现代医学及现代组织工程学中具有重要的临床意义和研究意义，目前在世界范围内投入的人力和经费正在迅猛增加，也正在吸引更多的科研机构和生物医学高技术产业参与研究与开发。目前，欧美发达国家投入了巨大的人力与经费加紧进入研究与开发，并在部分领域（如骨、软骨、肌肉、脑、造血干细胞等）取得了明显的进展，前景令人鼓舞。但这是一个全新的研究与应用领域，国外的研究结果大部分来自动物细胞，在各种干细胞的分离纯化、体外扩增与定向诱导分化的条件、诱导细胞的性能、体外组织重构及重构组织植入等许多方面均不明了；人类干细胞工程的研究则更是处于起步阶段。而国内的研究则主要集中在传统的组织工程方面，以干细胞为代表的现代组织工程学则尚未真正开始。 要进行干细胞的研究，关键有二：分化得到所需的组织的干细胞、了解干细胞分化为特定组织的条件。所以要进行研究，在前期首要的问题就是如何在体外增殖得到大量的干细胞。目前对MSCs的最优培养条件尚不明确，所以我们就以接种密度、血清浓度以及培养基种类三个条件来设计实验，得到MSCs体外最优的培养条件，本实验对体外培养增殖得到大量的干细胞，为后续分化等实验提供广泛的材料有重要的意义。 目前常用的MSCs分离的方法主要有两种：全骨髓法和密度梯度离心法。由于本实验的重点不在于MSCs的分离纯化，所以对这两种分离纯化的方法不再赘述。本实验采用的是密度梯度离心法和贴壁筛选法相结合的方法来培养骨髓间充质干细胞。 目前细胞计数的常见方法有流式细胞仪计数法和MTT法测定生长曲线。 流式细胞仪法：　细胞消化后悬浮在一定量的培养基中, 取0. 2 m l 细胞过滤后用流式细胞仪自动计数。 MTT 比色法计数：　MTT 比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线, 然后根据欲测样品的A 值计算出相应的细胞数. 本实验采取MTT比色法来测定下细胞的数目，绘制细胞的生长曲线。 2、课题任务、重点研究内容、实现途径 2.1 研究内容：优化大鼠MSC的培养条件。包括SD大鼠MSCs的原代分离纯化培养，大鼠MSCs 的鉴定，MTT比色计数法测定细胞