腹泻型肠易激综合征患者升结肠粘膜类胰蛋白酶对大鼠脊神经元%5bCa2%2b%5di影响.pdf

腹泻型肠易激综合征患者升结肠粘膜类胰蛋白酶 2+ 对大鼠脊神经元[Ca ]i 的影响 中文摘要 目的：测定腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome ,IBS-D) 患者升结肠粘膜类胰蛋白酶含量、及其对大鼠背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron ,DRGn) [Ca2+]i 的影响，探讨类胰蛋白酶在IBS-D 发病机制中的作用。 方法：获取20 例符合Rome Ⅲ标准IBS-D 患者、10 例健康志愿者的升结肠粘膜活 检组织孵育上清液(CMCS)，并测定其类胰蛋白酶含量(ELISA 法) 。分离、原代培养 SD 胚胎鼠DRGn ，并将其分为8 个处理组： 健康志愿者CMCS(A 组) ；IBS-D 患者 CMCS(B 组) ；IBS-D 患者CMCS ＋丝氨酸蛋白酶抑制剂Fut-175(C 组) ；PAR-2 抑制 剂预培养DRGn+IBS-D 患者CMCS(D 组) ；类胰蛋白酶0.42ng(E 组) ；类胰蛋白酶 0.73ng(F 组) ；类胰蛋白酶0.73ng+ Fut-175(G 组) ；PAR-2 抑制剂预培养DRGn+类胰 蛋白酶0.73ng (H 组) 。应用fluo-3 作为[Ca2+]i 示踪剂，用激光共聚焦显微镜观察处 理后DRGn 的[Ca2+]i 变化。 结果：IBS-D 患者升结肠粘膜组织类胰蛋白酶浓度为(0.078±0.021) ng/mg 组织，健 康对照组为(0.033±0.014) ng/mg 组织，差异有显著性意义(P =0.0000.05) 。 A-H 组的DRGn[Ca2+]i 分别为：34.70 ± 2.73，73.58 ± 3.37，33.53 ± 2.13，37.17 ± 2.72 ，36.34 ± 0.78，75.60 ± 0.79，45.13 ± 0.83 ，46.73 ± 1.22 ，其中B 组和 F 组 的值分别高于其他各组（P 均0.05 ），而 B 组与 F 组间差异无统计学意义 （PBF =0.712 ），A 、C 、D 、E 、G 、H 组间差异也无统计学意义（P 均0.05 ）。 结论：IBS-D 患者升结肠粘膜类胰蛋白酶量增加，类胰蛋白酶通过激活蛋白酶活化 受体-2(PAR-2)促使大鼠DRGn 钙信号释放，这可能参与了IBS-D 患者内脏高敏感性 的发生。 6 关键词：腹泻型肠易激综合征 内脏高敏感性 类胰蛋白酶 蛋白酶活化受体 DRG 神 经元 [Ca2+]i 7 The effects of ascending colonic mucosa tryptase in patients with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome on [Ca2+]i of rats dorsal root ganglion neurons Abstract Objective: To investigate the contents of tryptase in the ascending colon mucosa in patients with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome (IBS-D) and the effects of tryptase on calcium mobilization of embryonic rats dorsal root ganglion neurons (DRGn) in culture. Methods: The colon mucosal culture supernatants(CMCS