柯萨奇病毒B5巢式RT—PCR检测方法的建立.pdfVIP

JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) May 2013 Vo1．48 No．3 · 349 · doi：10．3969／j．issn．1671—6825．2013．03．015 柯萨奇病毒 B5巢式 RT—PCR检测方法的建立 段晶晶 ，刘国华 ，黄学勇 ，李幸乐 ，王 芳 ，胡小宁’，许汴利# 1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室 郑州 450001 2)郑州市疾病预防控制 中心传染病防治科 郑州 450007 3)河南省疾病预防控制 中心传染病预防控制所 郑州 450016 4)郑州市儿童医院感染性疾病科 郑州 450053 撑通讯作者 ，男，1958年3月生 ，主任医师，研究方 向：分子流行病学与传染病预防控制 ，E—mail：xubl@hncdc．com．an 关键词 柯萨奇病毒 B5；巢式 RT·PCR；检测 中图分类号 R373．23 摘要 目的：建立一种快速 、灵敏、特异的柯萨奇病毒 B5(CVB5)检测方法 。方法 ：根据 GenBank发表 的CVB5 河南分离株全基 因组序列 ，在其 VP1区设计并合成巢式 RT—PCR引物 ，优化 PCR反应条件 ，建立检测 CVB5的巢式 RT．PCR方法 。将 已测得 TCID 的病毒标准株进行 10倍梯度稀释后用上述方法检测 ，以评价该方法 的灵敏性 ；将 5 株不同的CVB5毒株和EV71等4株其他肠道病毒毒株及阴性对照用该方法进行扩增，以检测其特异性。用建立 的巢式 RT．PCR方法对 52份病毒性脑炎病例样本进行检测 。结果：该方法对 CVB5的两轮 PCR扩增敏感性分别为 10TCID。和 10一TCID。；所有 CVB5毒株用该方法扩增结果均为阳性 ，所选其他肠道病毒扩增结果均为阴性 。52 份临床病例样本中检出 l0份 CVB5阳性 ，阳性率为 19．23％。结论 ：所建立的CVB5巢式 RT—PCR检测方法具有 良 好 的灵敏度和特异度。 EstablishmentofnestedRT—PCR assayfordetectionofcoxsackievirusB5 DUANJingjing’’，LIUGuohua’，HUANGXueyong3，LIXingle ，WANGFang ，HUXiaoning，，XUBianli’ J)DepartmentofEpidemiology，CollegeofPublicHealth，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001 2) DepartmentofInfectiousDiseaseControlandPrevention，ZhengzhouCenterforDiseaseControlandPreven— tion，Zhengzhou450007 3)InstituteofInfectiousDiseaseControlandPrevention，HenanProvincialCenter rDiseaseControlandPrevention，Zhengzhou450016 4)Departmentof InfectiousDisease，Childrens HospitalofZhengzhou，Zhengzhou450053 Keywords coxsackievirusB5；nestedRT—PCR；detection Abstract Aim：Toestablisharapid，sensitive，andspecificmethodtodetectcoxsackievirusB5(CVB5)．Methods： TwopairsofprimersweredesignedaccordingtotheVP1sectionofCVB5 isolatedfrom Henanprovincenucleoproteingene sequencespublishedinGenBank．W ithoptimizedreactionconditions，areversetranscriptionnestedPCR assayfordetection ofCVB5wasdevelopedspecifically．Thestandardviursstrainswhich