标本保存时间对登革热病毒核酸及NS1抗原检测的影响.pdfVIP

实用医学杂志2015年第 31卷第 13期 · 检 验 与 临 床 · 标本保存时间对登革热病毒核酸及NS1抗原 检测的影响 易海粟 朱伟 温坤 陈满君 余楠 摘要 目的：探讨 4℃保存血液标本时间对登革热病毒核酸及抗原检测结果的影响。方法 ：2014年广 州登革热流行期间．收集 13份登革热疑似病例急性期全血标本 ，分别在采集后 2、6、12、24、48、72、96h取 血清进行登革热病毒核酸及抗原检测。结果 ：12份经核酸和抗原测定为阳性的登革热患者血清标本，7个 不同时间点的核酸和抗原检测结果均阳性，各时间点检测结果经重复测量资料方差分析 ，无统计学差异 (PCR：F：1．000，P0．05；ELISA：F=0．709，P0．05)；1份 阴性标本在 7个时间点两种方法结果均为 阴性。结论 ：4℃保血液标本4d内。对登革热病毒核酸及抗原检测结果没有影响。 关键词 登革病毒： 血液保存 ： 抗原检测 ； 核酸检测； 保存时间 据 WHO统计，登革热是世界上增长最快的虫 NS1抗原 (DENV—Ag denguevirusNS1antigen)，观 媒传播疾病。过去 50年期间。发病率增加了3O 察时间对结果的影响，为应对登革热疫情时实验 倍。全球每年有 5000万至 1亿人感染登革病毒 。 室大规模筛查提供标本合理保存的实验依据。 2014年广东爆发登革热大流行，累计报告病例超 1 对象与方法 过 4．2万例。其中83％的病例集 中于广州，给筛查 登革病毒感染的各级临床实验室带来 巨大考验。 1．1 研究对象 随机抽取 2014年 10月在我院就 目前登革热实验室诊断方法有登革病毒核酸、抗 诊的登革热疑似患者 13例 。其中血清核酸和抗原 原、抗体 (IgG／IgM)检测等。由于各种原因，基层医 检测为阳性的标本 l2份，1例疑似病例两种方法 院尚未开展登革热的实验诊断。标本转运不可避 检测为阴性。急性期采集全血标本 13份 ，每个病 免；突如其来的大规模集中筛查 。标本存放很常 例提供 l份血标本。 见，但标本存放条件及时间要求如何尚无依据。 1．2 试剂和仪器 登革热病毒通用型核酸测定试 合理保存标本是确保检测结果准确的重要手 剂盒 (荧光PCR法 ，上海之江生物科技股份有限公 段，保存条件因方法不同而各异，保存时间和温度 司．批号1)，登革病毒抗原检测试剂盒 均是影响核酸RNA检测和抗原检测的重要因素。 (酶联免疫法，北京万泰生物药业股份有限公司， 现低温保存标本已很容易实现 ，但保存时间需确 批号 DE；EX2400核酸 自动提取仪 (上 认。登革病毒属黄病毒科黄病毒属，是一种有包膜 海之江生物科技股份有限公司)；ABIViiA7实时 的单股正链 RNA病毒_l_。一般认为 RNA易被 荧光定量 PCR仪 (美 国lifetechnologies公司)， RNA酶降解 ，从而影响对病原体核酸的检测。丙肝 ELX808IU吸收光酶标仪 (美国BioTek公司)。 病毒为RNA病毒。研究证实血清4℃或一2O℃存 1．3 方法 用无抗凝无分离胶的真空采血管 ，采 放 1周对丙肝核酸定量并无影响[4-5]；但血清 4℃ 集全血标本后即3000r／min离心 8min，不分离 存放超过 2d．梅毒 甲苯胺红不加热血清试验 血清而置于4℃保存。分别于采血后 2、6、12、24、 (TRUST)结果会显著降低[；处于临界值的血清在