木霉对草酸耐受和消除作用的初步分析.PDFVIP

微生物学通报 Sep. 20, 2016, 43(9): 1988−1998 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150692 研究报告 木霉对草酸耐受和消除作用的初步分析 1 3 3 1 2 1 2 吴晓青 吕玉平 任何 赵晓燕 赵忠娟 张广志 李纪顺 1 2,3* 张新建 杨合同 (1. 250014) (2. 250014) (3. 255049) 摘 要：【目的】草酸(Oxalic acid ，OA)是灰霉菌(Botrytis cinerea)等植物致病菌的致病因子，一 些木霉(Trichoderma spp.)生防菌可消除草酸并降低植物发病率，但其消除草酸防治病害的途径和 机制尚未研究透彻。【方法】首先从42 株木霉菌株中筛选出一株在30 mmol/L 草酸胁迫下耐受性 最强的哈茨木霉 T. harzianum LTR-2 ，通过形态学方法观察和原位分析了不同浓度草酸胁迫下 LTR-2 的发育特征变化，并测定了草酸消除水平、滤液pH 和菌丝干重，分析了LTR-2 在草酸为 唯一碳源的生长情况。通过Real-time PCR 分析了OXDC 基因LTR_4445 在草酸处理下的表达水 平。【结果】在PDA 固体培养基中，25 °C 半光照条件下培养5 d ，在草酸浓度为50−80 mmol/L 时，LTR-2 可存活，但无正常菌落形态；在30−50 mmol/L 浓度下，LTR-2 先萌发厚垣孢子，而 后再次萌发菌丝形成菌落；在30 mmol/L 浓度下，LTR-2 发育正常，仅生长速度减缓。25 °C、160 r/min 振荡培养5 d，LTR-2 可消除草酸。在20 mmol/L 浓度时，草酸消除率最高，为66.50%；10 mmol/L 浓度中的消除率次之，为55.06%。草酸浓度50 mmol/L 时，消除能力下降为6.75%−38.94%。相 应地，培养液pH 被不同程度地提高，在 10、20 mmol/L 草酸浓度下提高的幅度更大。当草酸浓 度20 mmol/L 时，木霉的菌丝干重有不同程度的提高。将草酸作为唯一碳源进行液体培养 5 d 时，在10、20 mmol/L 浓度下，LTR-2 可形成肉眼可见的绿色菌丝球，但高于50 mmol/L 条件下 无法生长。草酸处理下，LTR_4445 表达水平上调。【结论】通过分析 LTR-2 在草酸胁迫条件下 的形态特征变化及消除草酸的特性，暗示在木霉消除草酸作用中除了已知的草酸降解代谢途径， 还存在响应草酸胁迫模式的转变、将草酸作为前体转化为营养物质的途径等其他消除途径。 关键词：哈茨木霉(Trichoderma harzianum) LTR-2 ，耐受草酸，发育模式，消除草酸 Foundation item: Research Award Fund for Excellent Young and Middle-aged Scientists of Shandong Province (No. BS2015SW029); Youth Fund Project of Shandong Academy of Sciences (No. 2014QN019); National Natural Science Foundation of