氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜生成的影响.PDFVIP

中 国 医 学 科 学 院 学 报 ＡＣＴＡＡＣＡＤＥＭＩＡＥＭＥＤＩＣＩＮＡＥＳＩＮＩＣＡＥ ·论　著 · 氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜生成的影响 １ ２ ３ ３ 崔冬清 ，孙铁英 ，黎　建 ，黄秀清 １中国医学科学院　北京协和医学院研究生院，北京 １００７３０ ２卫生部北京医院呼吸内科，北京１００７３０ ３卫生部北京医院老年病研究所，北京１００７３０ 通信作者：孙铁英　电话：０１０电子邮件：ｓｕｎｔｉｅｙｉｎｇ３＠ｈｏｔｍａｉｌｃｏｍ 　　摘要：目的　研究氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜产生量的影响，探讨密度感应系统在生物被膜调控中的作 用以及 型分泌系统表达和生物被膜形成的关系。方法　将２３株铜绿假单胞菌临床菌株在不同氧浓度环境下连续培养 Ⅲ ３ｄ，检测生物被膜和藻酸盐产生量，银染色法观察 ＡＴＣＣ２７８５３产生胞外多糖的时间窗，实时定量多聚酶链反应 （ＰＣＲ）测定密度感应系统中调控基因ＬａｓＩ和ＲｈｌＩ的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法观察 型分泌系统的代表毒素胞外酶Ｓ分泌 Ⅲ 情况。结果　铜绿假单胞菌的生物被膜产生量 （Ｒ＝０４５５，Ｐ＝００００）及藻酸盐产生量 （Ｒ＝０３６７，Ｐ＝００００）均与 氧浓度变化呈显著正相关。银染色法结果显示，高氧条件下胞外多糖合成时间缩短。实时定量 ＰＣＲ结果显示，ＬａｓＩ、 ＲｈｌＩ的相对表达量与氧浓度 （Ｒ＝００２５，Ｐ＝０７９４；Ｒ＝－００４４，Ｐ＝０６５３）、生物被膜产生量 （Ｒ＝０００１，Ｐ＝ ０９９０；Ｒ＝００１１，Ｐ＝０９０９）和藻酸盐产生量 （Ｒ＝００２９，Ｐ＝０７７０；Ｒ＝０１９３，Ｐ＝００６４）间无明显相关性。 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，铜绿假单胞菌在氧浓度为１０％～３０％条件下可分泌胞外酶 Ｓ，在高氧条件下不分泌胞外酶 Ｓ。 结论　高氧可促进铜绿假单胞菌生物被膜的产生。Ｌａｓ系统和 Ｒｈｌ系统可能因为菌群数量处于低水平而未在生物被 膜形成早期阶段参与生物被膜的调控过程。生物被膜的产生增多可能抑制 型分泌系统的表达，使该菌毒力发挥受 Ⅲ 到限制。 关键词：铜绿假单胞菌；生物被膜；氧浓度；密度感应系统； 型分泌系统 Ⅲ 中图分类号：Ｒ３７８９９＋１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１０００５０３Ｘ（２０１０）０３０３１００５ ＤＯＩ：１０３８８１／ｊｉｓｓｎ１０００５０３Ｘ２０１００３０１５ ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＬｅｖｅｌｓｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＯｘｙｇｅｎｏｎｔｈｅＢｉｏｆｉｌｍ ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ １ ２ ３ ３ ＣＵＩＤｏｎｇｑｉｎｇ，ＳＵＮＴｉｅｙｉｎｇ，ＬＩＪｉａｎ，ＨＵＡＮＧＸｉｕｑｉｎｇ １ＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌ，ＣＡＭＳａｎｄＰＵＭＣ