地塞米松、辛伐他汀对小鼠成骨细胞特异性转录因子和细胞增殖作用影响.pdfVIP

中文摘要 地塞米松 辛伐他汀对小鼠成骨细胞特异性转录因子和细胞增 殖作用的影响 摘 要 第一部分 地塞米松对小鼠骨髓来源的成骨细胞核心结合因子 蛋白表达的影响 目的 通过Western blot 实验分析地塞米松对骨髓来源的成骨细 胞核心结合因子 蛋白表达的影响 探讨骨髓基质干细胞体外向成骨 细胞定向分化的机制 方法 取雄性 8 周 ICR 小鼠股骨骨髓基质细胞进行原代和传代培 -8 养 在细胞培养同时间点加入 10 M 地塞米松 实验组 或保持基础 培养条件 对照组 于不同时间点提取细胞核基质蛋白后 应用 Western blot 实验分析地塞米松对骨髓来源的成骨细胞核心结合因子 蛋白的表达 通过其表达观察地塞米松对上述成骨细胞转录因子的 的影响 结果 在原代培养第五天 没有检测到核心结合因子 蛋白的表 达 传代后第二天地塞米松组与对照组无明显差异 传代后第四天时 地塞米松组核心结合因子 的表达高于对照组 传代后第六天时地塞 米松组核心结合因子 的表达仍然高于对照组 结论 10-8mol/L 地塞米松促进小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 而这种促分化作用可能与提高促成骨细胞分化的转录因子水平有关 关键词 骨髓干细胞 成骨细胞 细胞分化 核心结合因子 第二部分 辛伐他汀对小鼠骨髓来源的成骨细胞增殖的影响 目的 通过观察培养的骨髓基质干细胞形态和细胞增殖实验来分 析辛伐他汀对骨髓来源的成骨细胞形态及分裂增殖的影响 -8 方法 培养细胞分为实验组 培养基中含地塞米松 10 mol/L 和辛 1 中文摘要 5 -6 -7 伐他汀浓度分别为 10 10 10 mol/L 和对照组 培养基中含地塞 -8 米松 10 mol/L 和配制辛伐他汀溶液的对照液 原代培养小鼠骨髓基 质细胞于标准培养基中 不含地塞米松 第5 天细胞传代 传代细胞 按2000 个细胞 孔接种于96 孔培养板中 于传代培养当日分别加入 5 -6 -7 含Simvastain10 10 10 mol/L 的培养基 各组分别以加地塞米松 为对照组 采用CellTiter96 试剂盒 Promega 以2 日为间隔分别测定 各试验与对照组中每孔细胞数 5 -6 -7 结果 原代培养加入10 10 10 mol/L 辛伐他汀细胞实验组随 着培养时间延长细胞数量明显少于对照组 其细胞形态和细胞外基质 矿化较对照组更趋成熟 结论 辛伐他汀抑制骨髓基质干细胞体外增生并促进细胞外基质 矿化的作用 而且这种作用随着辛伐他汀抑制增生并促进细胞分化的 作用越明显 辛伐他汀在成骨细胞分化过程中与地塞米松起协同作用 关键词 骨髓基质干细胞 细胞增生 辛伐他汀 第三部分 地塞米松 辛伐他汀对小鼠骨髓来源的成骨细胞 型胶原 蛋白表达的影响 目的 通过基因转染的方法分析地塞米松 辛伐他汀对成骨细胞 型胶原蛋白的表达的影响以及确认培养的成骨细胞的分化阶段 -8 方法 取雄性8周ICR小鼠股骨骨髓基质细胞加入10 mol/L地塞米