莪术醇对鼻咽癌细胞CNE-2凋亡及NF-κB及Bcl-2表达影响.pdf

目 录 莪术醇对鼻咽癌细胞 CNE-2 凋亡及 NF-κB 与 Bcl-2 表达的影响………… Ⅰ 中文摘要……………………………………………………………… Ⅰ ABSTRACT ………………………………………………………… …Ⅲ 英汉缩略词对照表……………………………………………………………Ⅵ 前言……………………………………………………………………………1 1 材料与方法 ………………………………………………………………… 5 1.1 实验细胞株……………………………………………………………5 1.2 主要实验试剂………………………………………………………………5 1.3 主要实验仪器 ………………………………………………………………6 1.4 实验方法 ……………………………………………………………………7 1.5 统计方法……………………………………………………………………15 2 结果 …………………………………………………………… …… 16 2 . 1 M T T 法结果 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 1 6 2.2 形态学观察…………………………………………………………………17 2.3 流式细胞术检测 CNE-2 细胞凋亡 ……………………………………… 19 2.4 Western Blot 检测 NF-κB 和 Bcl-2 的蛋白表达………………………… 21 3 讨论………………………………………………………………………… 24 3.1 莪术醇的抗肿瘤作用……………………………………………………24 3.2 莪术醇对 NF-κB 蛋白表达的影响 ………………………………………25 3.3 莪术醇对 Bcl-2 蛋白表达的影响 ………………………………………26 3.4 莪术醇诱导鼻咽癌凋亡的分子机制………………………………………27 4 结论 ………………………………………………………………… 29 参考文献 ………………………………………………………………30 综述……………………………………………………………………………37 攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………………45 致谢……………………………………………………………………………45 II 莪术醇对鼻咽癌细胞CNE-2 凋亡及NF- κB 与 Bcl-2 表达的影响 中 文 摘 要 目的：研究体外不同浓度莪术醇（curcumol）诱导鼻咽癌细胞 CNE-2 凋亡及其对核因子- κB （Nuclearfactor kappa B，NF- κB）与凋亡抑制蛋 白 Bcl-2 表达的影响。探讨莪术醇对鼻咽癌细胞 CNE-2 凋亡的诱导作用， 初步阐明莪术醇的诱导细胞凋亡的机制，为莪术醇抗肿瘤的临床应用提供 实验依据。方法：将莪术醇溶于无水乙醇，初始浓度为 10mg/mL。按比例浓 度配制为 12.5、25、50、100 μg/mL 莪术醇培养基，并以含 1%无水乙醇培 养基为阴性对照组。采用 MTT 法检测 12.5、25、50、100 μg/mL 四种不同 浓度莪术醇作用 CNE-2 细胞 24、 48、 72、 96、120 h 后细胞增殖抑制作 用;采用 hochest33342 荧光染色法观察莪术醇处理 CNE-2 细胞 48 h 后细胞 凋亡的形态学变化;采用流式细胞术检测莪术醇处理 CNE-2 细胞 48 h 后的 凋亡率；采用 Western Blot 检测莪术醇处理 CNE-2 细胞 48h 后 NF- κB和 凋亡抑制蛋白 Bcl-2 的表达。结果：12.5-100 μg/mL 莪术醇可以抑制细胞 增殖，莪术醇对细胞增殖的抑制作用随莪术醇浓度增加和作用时间延长 (12.5μg/mL 以外)而逐渐增强，药物作用 48、72、96、120 h 后，加药组 的抑制率与对照组比较，有显著性差异 （P0.05)，而 12.5 μg/mL 药物处 理组与对照组相比差异无显著性（P0.05）； Hoechst33342 染色荧光显微 镜下可见经 100 μg/mL 莪术醇作用 48h 后，普通光学显微镜下形态学表现 为细胞体积缩小、细胞脱落、染色质聚集、核固缩、核碎裂等