CD151对血管平滑肌细胞迁移%2f增殖影响及反义基因表达抑制大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的研究.pdf

华中科技大学同济医学院 2003级博士论文 CDl 51对血管平滑肌细胞迁移／增殖的影响及反义基因 表达抑制大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的研究 华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科 博士研究生 杨军 导 师 刘正湘 中文摘要 第一部分 CDl51基因转染对大鼠血管平滑肌细胞迁移和增殖的影响 目的：观察正义和反义CDl51基因转染对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细 胞(VSMCs)迁移和增殖能力的影响。 脉VSMCs，以阳离子脂质体介导的方法将pcDNA3．1真核表达载体携带的正义 下列实验：(1)以RT-PCR和Western 达；(2)以Boyden趋化小室及细胞划痕修复方法观察细胞迁移功能：(3)以 MTT比色法和流式细胞仪检测细胞周期的方法评估细胞增殖能力。 um微孔 171％，蛋白表达增力1：1133％。(2)VSMCs迁移：穿过Boyden趋化小室8 载体对照组、脂质体对照组和空白对照组之间无显著差异(口O．05)；正义CDl51 6．24％)显著低于其他各组；载体对照组、脂质体对照组和空白对照组之间无显 OD值，正义 华中科技大学同济医学院 2003级博士论文 照组)，各组之间无显著差异(口0．05)。 结论：pcDNA3．1真核表达载体介导的正义CDl51基因转染可显著促进大鼠 关键词：CDl51基因；反义核酸；平滑肌细胞；细胞迁移；细胞增殖 第二部分 反义CDl 51基因对大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的影响 目的：在证实CDl51具有调控VSMC迁移功能的基础上，进一步观察反义 CDl51基因局部转染对大鼠颈动脉球囊损伤后管腔再狭窄的效果，以探讨基因疗 法防治再狭窄的新靶点。 方法：成年雄性SD大鼠(350—400克)45只，随机分入三组，分别为基因 血管的对侧颈动脉标本为正常对照组。建立大鼠颈动脉球囊损伤模型。采用血管 腔内保留灌注和血管外膜渗透两种途径，在基因治疗组大鼠的球囊损伤血管局部 盐水)。术后正常饲养。各组提取术后7天时的造模血管段组织(每组5只)的 的造模血管标本，以HE染色观察形态学变化，测算内膜面积(IA)、中膜面积(MA)、 IA／MA以及动脉狭窄程度；以免疫组化方法分析CDl51的组织形态表达。 结果：(1)CDl51在转染血管的表达：基因治疗组血管mRNA表达水平显著 华中科技大学同济医学院 2003级博士论文 低于载体对照组和NS对照组(PO．05)。正常对照组则显著低于载体对照组和 治疗组血管蛋白表达水平显著低于载体对照组和NS对照组(均P0．01)，而与 正常对照组无显著差异(P0．05)；载体对照组和NS对照组均显著高于正常对照 态学变化：HE染色病理切片观察，基因治疗组的IA、IA／MA以及动脉狭窄程度 均显著小于载体对照组和NS对照组(均P0．05)载体对照组和NS对照组的上 述指标无显著差异(均P0．05)。免疫组化病理切片见CDl51在各组血管内膜、 中膜和外膜均有棕褐色的阳性染色，主要分布在内膜的血管平滑肌细胞表面。基因 治疗组、载体对照组和NS对照组血管CDl51表达均较正常对照组血管增强，基因 治疗组的CDl51阳性染色明显弱于载体对照组和NS对照组。 结论：反义CDl51基因局部转染可显著抑制大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增 生，减轻管腔再狭窄程度，表明在再狭窄形成机制中，CDl5发挥重要作用，可将 其作为有效的基因治疗靶点。 关键词：CDIS睡IN，反义核酸，颈动脉，再狭窄