雌激素对星形胶质细胞缺氧、缺糖损伤影响及其机制探讨.pdfVIP

摘 要 目的研究17-13雌二醇对大鼠大脑皮层星形胶质细胞(AS)缺 氧、缺糖损伤的影响，并对其可能的机制进行初步探讨。 方法 原代培养Sprague-Dawley大鼠大脑皮层AS，建立缺氧、 缺糖损伤模型，以吉姆萨染色观察细胞形态学变化；以透射电镜观察 细胞超微结构尤其是凋亡小体的变化；以四甲基偶氮唑盐(MTT)还 原实验检测细胞活力；以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指 标；以流式细胞术检测细胞凋亡率，研究氧糖剥夺(OGD)对AS的影 响。在此基础上，通过钙离子敏感的荧光探针Fura-2／AM负载细胞， 荧光双波长分光光度计检测细胞内钙离子浓度的变化；以黄嘌呤氧化 酶法、硫代巴比妥酸法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二 醛(MDA)含量的变化；免疫细胞化学染色和RT-PCR方法观测凋亡相 关分子Caspase-3和Caspase-12在OGD前后的变化。 结果①17-13雌二醇增强细胞活力的效应lOnmol／L开始出现， L开始，也是在20nmol／L达到最高峰。②缺氧缺糖处理即刻、缺氧 二醇，均使缺氧缺糖损伤AS细胞活力增高，LDH漏出率降低，细胞 凋亡率降低。其中缺氧缺糖处理前24h加入17一B雌二醇在上述5个 时间点中，增强细胞活力的效应最强。③缺氧缺糖损伤可使细胞内游 离钙离子浓度显著增高，17-B雌二醇预处理后可明显降低钙离子浓 度，调节钙稳态失衡。④缺氧缺糖损伤可致AS内SOD活性降低，MDA 含量升高，17-B雌二醇预处理后可显著升高SOD活性，降低MDA的 含量。⑤RT—PCR和免疫细胞化学染色结果显示，缺氧缺糖可使AS内 处理后可显著抑制两者的表达。 结论①17-13雌二醇对体外培养AS缺氧、缺糖损伤具有直接的保护 作用，并呈一定的量效、时效关系。②17-B雌二醇可能通过调 损伤AS发挥保护作用。③17-B雌二醇对缺氧、缺糖损伤皮层 AS的保护作用可能与提高SOD活性或降低其消耗率，从而抑制 缺氧、复氧过程中大量生成的氧自由基对DNA和细胞器膜等的损 伤有关；可能与降低脂质过氧化反应有关。 关键词星形胶质细胞，雌激素，凋亡，氧糖剥夺 Ⅱ ABSTRACT To theeffectsof1 estradioloncerebral objectiveinvestigate 7-13 cortical to and astrocytessubjected deprivedinjury oxygen—glucose themechanisms explore mediatedtheeffects． Methods cortical were culturedcerebral Primary astrocytes from acell modelwas prepared rats，and Sprague—Dawley damage induced ofcell byoxygen-glucosedeprivation(OGD)．Thechange wasobservedGiemsasandtransmissionelectron morphology by staining