磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶介导的.PDF

微生物学通报 Aug. 20, 2017, 44(8): 1777−1784 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160766 研究报告 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶介导的 草酰乙酸回补途径对谷氨酸棒杆菌 V1 氨基酸代谢的影响 1 1 1 1 2* 张旦旦 仇爱梅 鲍勇 窦文芳 许正宏 (1. 江南大学药学院制药工程研究室 江苏 无锡 214122) (2. 江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 江苏 无锡 214122) 摘 要：【目的】谷氨酸棒杆菌是工业生产氨基酸的主要菌株，以缬氨酸高产菌株谷氨酸棒杆菌 V1 为研究对象，探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)介导的 草酰乙酸回补途径对菌株生理特性以及主要氨基酸代谢流量的影响。【方法】通过基因工程手段， 在谷氨酸棒杆菌V1 中过表达pepc (编码PEPC)和pck (编码PCK) ，比较重组菌与出发菌关键酶 活性、发酵特性以及主要氨基酸积累量变化。【结果】构建两株重组菌V1-pepc (强化草酰乙酸回 补途径)和V1-pck (弱化草酰乙酸回补途径) ，重组菌生长均较出发菌延缓，总生物量、葡萄糖和 硫酸铵消耗基本不变；过表达pck ，PCK 活性提高22.8% ，丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、精氨酸积 累量分别提高了11.8%、17.2%、27.8%和19.5%；过表达pepc ，PEPC 活性提高27.5% ，同时PC 活性降低12.9%，天冬氨酸族和谷氨酸族氨基酸的整体流量变化不大，丙氨酸族氨基酸的整体流 量降低了 14.7%。【结论】丙氨酸族氨基酸受此回补途径影响较大，天冬氨酸族氨基酸受此影响 较小。 关键词：谷氨酸棒杆菌 V1 ，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶，磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶，草酰乙酸回 补途径，缬氨酸 Foundation item: National High-Tech RD Program of China (863 Program) (No. 2012AA022102) *Corresponding author: Tel: 86-510 E-mail: zhenghxu@163.com Received: October 21, 2016; Accepted: December 21, 2016; Published online () : January 10, 2017 基金项目：国家高技术研究发展计划项目(863 计划) (No. 2012AA022102) *通讯作者：Tel ：86-510；E-mail ：zhenghxu@163.com 收稿日期：2016-10-21 ；接受日期：2016-12-21 ；优先数字出版日期() ：2017-01-10 1778 微生物学通报 Microbiol. China 2017, Vol.44, No.8 Effects of oxaloacetate anaplerotic reaction mediated by phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) and phosphoenolpyruvate carboxykinase (PCK) on amino acid etabolism of Corynebacterium glutamicum V1 ZHAN