支原体检测荧光法与PCR法灵敏度实验.docVIP

支原体检测荧光法和PCR法灵敏度实验 目的 通过实验获得支原体检测荧光法和PCR法灵敏度数据，了解两种方法的灵敏度，以确定支原体检测采用的实验方法。 试验方法和材料 方法：用已知支原体污染的样本作为阳性样本，通过系列稀释，检测稀释后的样本的的支原体检测结果，用荧光法和PCR法两种方法检测，比较两种方法的差异。并且荧光法在第二次读数时，每2分钟读一次数，观察读数的变化。 实验材料和试剂：取支原体阴性细胞215和支原体阳性细胞216分别作为阴性和阳性实验样本。荧光法支原体检测试剂盒使用LONZA MycoAlert Mycoplasma Detection Kit ，PCR支原体检测试剂盒使用HD MycoScan。 实验步骤 把阴性样本215按30，120，480，1920倍稀释，把阳性样本216按30，60，120，240，480，960，1920，3840倍稀释。 按荧光法试剂盒操作步骤操作，把1系列稀释的样本进行检测，读取A值，并且在第一次A值读数后两分钟再读取A值一次。 按荧光法试剂盒操作步骤操作，读取B值，并且在第一次B值读数后每两分钟读取B值一次，一共读取10次。 计算B/A值的结果。 取1系列稀释的样本用PCR法检测。 实验结果 根据荧光法和PCR法检测结果比较，荧光法通过延长反应时间，可以检出稀释240倍的阳性216样本的支原体，PCR法检测支原体的灵敏度在本次实验中也是样本240倍稀释这个范围。所以通过改良后的荧光法和PCR法检测支原体的灵敏度是基本差不多的。而荧光法检测所需时间大概是1小时，而PCR法检测时间需要8小时左右，因此荧光法是一个更适合实验室支原体检测的方法。使用荧光法检测样本支原体在第一次读取B值后，在过20分钟读取一次B值，可以增加试剂的灵敏度，可最大化检测出支原体。