紫色非硫光合细菌培养基条件优化研究.docVIP

紫色非硫光合细菌培养基条件优化的研究 摘要:采用光合细菌中的紫色非硫细菌为材料,通过单因素试验和正交试验分析了其对碳源、氮源、酵母膏和复合无机盐的利用能力.结果表明,乙酸钠和酵母膏对紫色非硫细菌的生长影响达到显著水平;其优化培养基为每升中含乙酸钠3 g、氯化铵3 g、酵母膏0.1 g,复合无机盐溶液1 mL,这为快速培养高活性光合细菌奠定了基础. 关 键 词:光合细菌;培养基优化;正交试验 光合细菌(photosynthetic bacteria;PSB)是一种能以光作能源并以二氧化碳或小分子有机物作碳源、 以硫化氢等作供氢体,行完全自养性或光能异养性生长但不产氧的一类微生物的总称[1].它是细菌中最为 复杂的菌群之一,在自然界中分布极广,只要有水和光存在,不论其环境为好气性还是攘气性均能生存繁 殖,是一种生命力极强的菌体[2].目前所知的光合细菌可分为着色杆菌科、外硫红螺菌科、紫色非硫细菌、 绿色硫细菌、多细胞丝状绿细菌、螺旋杆菌科、含细菌叶绿素的专性好氧菌等7大类群[3]. 光合细菌菌体含有丰富的蛋白质、氢基酸、维生素、抗病毒活性因子、辅酶Q以及多种生理活性物质, 其用途极为广泛[4].在水产养殖和畜牧业上可以作为动物的优质饵料和饲料[5];在污水处理上可以有效去 除废水中的有机物、氮、磷和硫化物等有害物[6];在农业上可以作为一种高效菌肥,对增进土壤肥力等方面 有重要作用[7].另外,最备受关注的是光合细菌具有产氢不放氧,且产氢纯度高等特点,被认为是很有希望 的绿色氢来源之一[8]. 光合细菌的推广和应用,需要合适的培养基质,但目前用于培养光合细菌的培养基具有平均富集时间 较长、培养基成分种类多以及成本较高等缺点,限制了光合细菌在生产上的广泛应用.为此,本文以光合细 菌中的紫色非硫细菌为材料,对其培养基条件的优化进行了研究,为高活性光合细菌的推广应用提供理论 基础. 1 材料与方法 1.1 菌种来源 光合细菌)))紫色非硫光合细菌由广西南宁助农种养技术服务部提供. 1.2 培养基的制备 优化培养基试验采用《微生物学实验教程》[9]中细菌培养基的基本配方,其组成如下:NH4Cl 1 g,丁 二酸钠1 g,KH2PO40.2 g,MgSO4#7H2O 0.005 g,Na2CO30.2 g,酵母膏0.1 g,复合无机盐溶液1 mL, 水1 000 mL,pH=7.0. 复合无机盐溶液组成为:EDTA 0.5 g,FeSO4#7H2O 0.2 g,ZnSO4#7H2O 0.01 g,硼酸0.03 g, MnCl2#4H2O 0.003 g,CaCl2#2H2O 0.02 g,NiCl2#6H2O 0.002 g,CuCl2#2H2O 0.001 g,Na2MoO4 #2H2O 0.003 g,水100 mL,HCl调pH=3.0. 1.3 接种 选择菌种活性度大,即色泽呈凿红色,菌液中菌体分布均匀未见有下沉现象,光密度高的菌液选作菌液母剂.接种后3~5 d内,若发现菌液转为红色较慢,或菌体发生下沉,说明其活性减弱,需重新配制培养 基,选用活性较强的菌种进行接种. 1.4 培养条件 以质量浓度5%的接种量将菌种接种于300 mL小口试剂瓶中,在光照培养箱中800~1 500 lux光照 强度下厌氧培养,pH=7.0,温度30e,培养时间为5 d[10].光合细菌培养可观察到其颜色随着时间变化 为:无色→粉红→红色→深红.一般在第2天时转为粉红色,第3、4天变为红色,到第5天即可达到深红, 故本试验选择的培养时间为120 h. 1.5 菌种光密度值测定 经培养一定时间后的菌液,用721型分光光度计测定其在660 nm处的OD值即可得知细菌的生长密 度,以此来判断菌种的生长状况. 1.6 碳氮源优化 以蔗糖、淀粉、乙酸钠、柠檬酸钠4种碳源,分别替换培养基中的丁二酸钠配置培养基,以氯化氨、硫酸 氨、蛋白胨、硝酸钠4种氮源,分别替换培养基中的氯化氨配置培养基. 1.7 正交试验 根据单因素试验的结果设计了4因素3水平(乙酸钠、氯化铵、酵母膏、复合无机盐)的正交分析表,试 验设计如表1. 表1 4因素3水平正交分析表 处理号Q乙酸钠Q氯化氨Q酵母Q复合无机盐 1 1(0.2%) 1(0.3%) 1(0.01%) 1(0.1%) 2 1(0.2%) 2(0.4%) 2(0.03%) 2(0.2%) 3 1(0.2%) 3(0.5%) 3(0.05%) 3(0.3%) 4 2(0.3%) 1(0.3%) 2(0.03%) 3(0.3%) 5 2(0.3%) 2(0.4%) 3(0.05%) 1(0.1%) 6 2(0.3%) 3(0.5%) 1(0.01%) 2(0.2%) 7 3(0.4%) 1(0.3%) 3(0.05%) 2(0.2%