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几种选择性分离稀有放线菌的方法肖　炜　李铭刚　崔晓龙　李一青　文孟良＊＊(云南大学云南省微生物研究所教育部微生物资源开放研究重点实验室　昆明　650091)摘要:由于从常见放线菌中发现新化合物的几率越来越小, 人们开始将目光集中于稀有放线菌。作者介绍了近年来出现的胞外多糖胶与动孢溶液相结合的分离方法、再水化-离心法、极高频辐射法、噬菌体定向分离法和蔗糖梯度离心法等用于稀有放线菌选择性分离的方法, 以及这些稀有放线菌在产生生物活性物质方面的潜力关键词:稀有放线菌, 选择性分离, 分离方法, 活性物质中图分类号:Q939　　文献标识码:A　　文章编号:0253-2654 (2006)01-0133-05SomeApproachesfortheSelectiveIsolationofRareActinomycetesXIAOWei　LIMing-Gang　CUIXiao-Long　LIYi-Qing　WENMeng-LiangYunnanInstituteofMicrobiology,YunnanUniversity, Kunming650091)Abstract:Thefocusofmicrobiologistshasmovedtotherareactinomycetes.Forselectiveisolationofrareactino-mycetesthatallplaytheimportantroleinbioactivecompounds, theapproacheswhichinvolvethemethodsusinggellangumandfloodingsolution、 rehydration-centrifugation(RC)、extremelyhighfrequencyradiation(EHF)、bacteriophageandsucrose-gradientcentrifugationwereintroducedinthispaper.Keywords:Rareactinomycetes, Selectiveisolation, Isolationmethods, Bioactivecompounds放线菌作为生物活性物质的主要产生菌早已成为人们研究的焦点。然而随着放线菌分离和分类研究的不断深入, 大量常见菌株已被反复研究, 因此从中发现新化合物的几率逐渐降低。由于新物种具有产生新的生物活性物质的潜力, 人们开始使用新的方法在尽可能广泛的范围内寻找新的物种, 特别是那些用常规方法很少分离到的稀有放线菌 (rareactinomycetes)[ 1]。 20世纪 50年代以来人们从稀有放线菌中发现了大量有价值的抗生素, 如小单孢菌产生的庆大霉素, 诺卡氏菌产生的利福霉素, 马杜拉放线菌产生的马杜拉霉素和洋红霉素, 糖多孢菌产生的红霉素, 游动放线菌产生的游壁菌素, 拟无枝酸菌产生的万古霉素等等。这些事实表明稀有放线菌也具有产生新抗生素的巨大潜力[ 1, 2]。分离这些稀有放线菌, 不仅可以减少对产生已知生物活性物质菌株的重复分离, 还可扩展放线菌次生代谢产物的化学多样性。由于稀有放线菌对生长环境的特殊要求, 难以用常规手段分离获得, 所以要根椐不同类群的特性设计针对这些特定种属的选择性分离方法。近年来, 国内外学者在对稀有放线菌选择性分离的研究方面取得了较大进展[ 3～ 6], 同时也用这些选择性分离方法分离到不少稀有放线菌, 并显著提高了具有医用前景的生物活性物质的发现机率。此外, 这些分离方法的使用也有助于回答这样一个问题:稀有放线菌很少被分离到是因为它们在环境中数量稀少, 还是仅仅因为它们难以被分离和培养。本文就以上情况介绍了近年来发展起来的几种高选择性分离稀有放线菌的有效方法胞外多糖胶 (gellangum)和动孢溶液 (floodingsolution)相结合的分离方法Gellangum是由Pseudomonaselodea产生的胞外多糖, 过去常用来作为植物组织培养的凝固剂, 能促进植物生长。 Suzuki等人[ 3]首先将其用于稀有放线菌的分离, 并发现胞外多糖胶能促进很多放线菌的气生菌丝生长和孢子形成。很多物质都能增加放线菌游动孢子的游动性, 如蛋白胨, 牛肉膏, 含土壤浸汁的磷酸盐缓冲液, 脱脂牛奶等。各种动孢溶液对不同的菌影响不同, Suzuki等在使用脱脂牛奶作为动孢溶液时发现不同的菌对脱脂牛奶的浓度、 pH、处理时的温度、离心时的速度及时间有不同的要求。另外, 使用高压灭菌后的脱脂牛奶比使用未灭菌的脱脂牛奶所获得的游动孢子数少, 这可能因刺激孢子游动性的物质对高温高压敏感所致[ 4]选择性分离鱼孢菌Suzuki等曾以鱼孢菌作为他们筛选生物活性物质的目标菌 ,对采自 28个国家的 46