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第七章 色层分离法 色层技术（层析技术）  色层法是目前广泛应用的一种分离技术， 本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用 这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素 还含有其它色素。现在色层法已成为生物工 程、生物化学、分子生物学及其它学科领域 有效的分离分析工具之一。 色层分离方法 －Chromatography 色层分离法是一组相关分离方法的总称，它 的机理是多种多样的，但不管哪种方法都必 须包括两个相。一相是固定相，通常为表面 积很大的或多孔性固体；另一相是流动相， 是液体或气体。当流动相流过固定相时，由 于物质在两相间的分配情况不同，经过多次 差别分配而达到分离，或者说，易分配于固 定相的物质移动速度慢，易分配于流动相中 的物质移动速度快，因而得到逐步分离。 层析法的发展过程 1903年 Tswett发表了吸附色谱分离植物色素的论文， 三年后他在另外两篇论文中正式提出色谱法。 1931年 色谱法提出后，并未立即受到重视。经过大 约20 年，由于Lederer的工作，人们才重视色谱技术。 1938年 Izmailov和Shraiber第一次使用薄层色谱法。 1938年 Taylor和Uray 用离子交换分离锂和钾的同位 素。40 年代，合成离子交换树脂商品出现后，离子 交换色谱才得到广泛应用。1944年在美国橡树岭国 家实验室和衣阿华州立大学分离和鉴定了稀土元素。 在1944年到50年代中，芝加哥大学和加州大学完成 了超铀元素的分离。 1941年 Martin和Synge发展了分配色谱。 1944年 Martin等发展了纸色谱。 1952年 Martin和James发展了气-液分配色谱。 1956年 Van Deemter等发表关于色谱效率的 速率理论，并应用到气相色谱中。 1957年 制作离子交换色谱氨基酸分析仪。 1959年 在Cordon Conference上提出了第一 篇凝胶过滤色谱的报告。 1963年 Giddings的理论工作为现代液相色谱奠 定了理论基础。 60年代中期 凝胶渗透色谱出现。 60年代后期 亲和色谱出现。 1969年 现代液相色谱开始受到重视。 有两次诺贝尔化学奖是授予色谱学领 域的研究工作：1948年瑞典科学家 Tiselins 由于他的关于电泳和吸附分 析的研究获奖，1952年英国的 Martin和Synge因为发展了分配色 谱而获奖。 层析的原理 “层析谱的本质是使一种液体均匀地渗 过一个相当细碎的物质的柱体，这 些物质通过某种过程有选择地阻留 了液体内的某些组分。” —— 马丁（A. J. P. Martin）（英） 层析分离法 常用的层析技术有 (亲和层析、离子交换层析、 凝胶排阻层析、凝胶电泳） 特点：  （1） 纯化倍数高  （2） 操作规模小，放大困难  （3）最终产品纯化  （4） 适用于价格昂贵的产品 层析分离分类（1） 按溶质分子与固定相相互作用机理 吸附层析（范德华力，氢键，静电力，共价力）  分配层析（溶质在两液相间分配系数不同） 凝胶 过滤（分子大小与形状） 实验技术分类 低压（小于0.5 Mpa)  中压 (0.5-5 Mpa)  高压 (5-40 Mpa)  电泳 (溶质在电场中移动） 层析分离分类（3） ⑴分析色谱（10mg） ⑵半制备色谱(10-50mg) ⑶制备色谱(0.1-1g) ⑷工业生产规模色谱(20g/d) 年产10g合格的重组人粒细胞集落刺激因 子（rhGcs-F），其产值高达1亿元。 层析分离分类（3）  根据固定相形状分类  柱层析  纸层析  薄层层析  根据流动相分类  气相层析  液相层析  超临界流体层析  按操作方式分类（展开）  迎头法（frontal analysis)  顶替法 （displacement analysis)  洗脱分析（elution analysis)