重组慢病毒CD133-miR30-shRNA的构建及抗肝癌细胞生长的作用.pdfVIP

用医学杂志2016年第32卷第 1O 1571 重组慢病毒CD133一miR30一shRNA的构建及 抗肝癌细胞生长的作用 牛 坚 王月 刘斌 p 摘要 目的：构建沉默 CD133基因的miR30一CD133慢病毒，探讨其对肝癌细胞株SMMC7721生物学行 为的影响。方法：针对已经筛选确定的CD133基因干扰有效序列，合成靶序列的OligoDNA，与pPRIME载 体连接 用pPRIME．miR30一CD133、psPAX2和 pMD2G3种质粒共转染293T细胞 ，包装产生慢病毒 ，测定 r 病毒滴度 ；荧光显微镜下测定病毒感染效率；qRT．PCR、Westernblot检测 CD133表达；CCK．8法检测细胞 生长：annexinV／PI检测细胞凋亡。根据实验要求(1)Blank组 ；(2)shNC组；(3)shCD1