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西伯利亚与黄天霸 正反交实验及杂种胚离体培养 夏晶1，吴学尉2，3，崔光芬2，3，吴丽芳2，3，王继华2，3，贾文杰2，3，张艺萍2，3 1西南大学园艺园林学院，重庆，400716； 2云南省农业科学院花卉研究所云南昆明，650205云南昆明，650205 1、黄天霸×西伯利亚 授粉30天后出现败育趋势； 2、西伯利亚×黄天霸 授粉后53天，果实饱满 图2 授粉后蒴果的生长情况 2.2 剥去胚乳对种胚的萌发及其萌发率的影响 以黄天霸为父本的组合得到了有胚种子，蒴果授粉后60天左右适合剥胚处理，未开裂蒴果用75%乙醇对表皮进行擦拭消毒，再浸泡30s，然后用0.1%升汞灭菌20分钟效果较好，污染率较低。 表1 剥除胚乳处理对胚萌发率的影响 处理 种胚数 萌发种胚数 萌发率 萌发整齐度 剥除胚乳 89 76 84.3% 8±2天 未剥除胚乳 25 5 20% 47.5±17天 从表1可以看出，剥除胚乳后的种胚萌发率明显高于未剥除胚乳的种胚，且萌发时间大大缩短，整齐度也较未剥除胚乳的情况高得多。在实验中观察发现，一定时间的预培养有利于种皮、胚乳、胚分离，在大约30天的预培养时间里，种皮褐化，胚乳与胚分离容易，剥除后容易看见幼胚，从而不易损坏幼胚。由此推测，幼胚趋于成熟在胚乳中可见时，种皮和胚乳在某种程度上阻碍了胚的伸出。剥除种皮及胚乳的幼胚比未剥除种皮和胚乳的幼胚萌发率高64.3%，且萌发时间缩短39.5±15天，整齐度高。 2.3 添加外源激素及不同培养条件对种胚离体培养的影响 表2 激素类型及培养条件对种胚发育的影响 条 件 激素 类型 种胚数 萌发胚数 萌发率/% 萌发时间/d 生长状况 光 照 培 养 MS1 18 16 88.90 7±1 萌发初期胚直接伸长弯曲，萌发后叶片细长，深绿色，生长快速，最终长成细长小苗，根细，叶细。 MS2 17 14 82.30 8±1 萌发初期胚有变粗，萌发后，叶片较MS1嫩绿，短壮，生长速度中速。 MS3 18 18 100.00 8±1 萌发初期生长较慢，但萌发整齐，萌发后叶片短嫩，根亦短壮。 暗 培 养 MS1 12 8 66.70 8±1 萌发后，生长迅速，但细弱。 MS2 12 8 66.70 9±2 萌发后，膨大成小球，较MS1粗壮，生根整齐，根长约0.5cm。 MS3 12 12 100.00 11±1 萌发后，膨大生成小球，部分生出小短根。 从表2可以看出，无论是光照培养还是暗培养，MS3均得到100%的萌发率，MS2及MS1两种培养基条件下，在光照条件下的萌发率比暗培养的萌发率高15.6%、22.2%。在萌发时间上，幼胚培养的前期进行光照处理有利于胚的萌出，比暗培养提前萌发1-3天。 从图3可以看出，光照培养时，当培养基中单独添加GA3时，由于其有促进节间生长作用，使得前期胚萌发快，生长迅速，但瘦弱细长。当GA3与NAA同时添加时，由于NAA促进茎和节间伸长及生根作用，使得胚发育前期虽然萌发生长速度较MS1缓慢，但萌出的苗较MS1粗壮、幼嫩。而单独添加NAA的MS3培养基，萌发较整齐，且萌发率高。在暗培养的情况下，添加GA3的MS1培养基由于生长过快，小苗细弱，虽然前期萌发生长速度快，但后期成苗瘦弱，不利于养分积累生成小球，在MS2培养基中，苗的萌发较慢，形成的小球较MS1粗壮。在MS3培养基中，虽然萌发较前两者稍慢，但整齐度高，成苗短而壮。 1、MS1培养基中光照培养；2、MS2培养基中光照培养；3、MS3培养基中光照培养；4、MS1培养基中黑暗培养；5、MS2培养基中黑暗培养；6、MS3培养基中黑暗培养 图3 剥出的幼胚于不同培养基及培养条件上培养30天的生长情况 3 讨 论 本实验以西伯利亚百合与黄天霸百合进行常规杂交，在杂交过程中，花粉是否具有生命力是确保杂交成功的一个重要条件。因此在杂交育种工作中，不论是采用新鲜花粉还是贮藏的花粉，在杂交之前都要对花粉生命力进行测定。从理论上讲，西伯利亚更适合做父本。但本实验表明：由于OT系百合花柱较长，往往父本花粉管不能到达子房底部，造成子房顶端虽然能膨大，而底端萎焉败育，因此虽然西伯利亚花粉有较高的萌发率，但没有得到理想的结实率；而黄天霸虽然花粉的萌发率偏低，反而在作为父本的杂交中得到了少量有胚果实。因此，在以OT系百合为母本的杂交中，采取切割花柱的方法可能会提高杂交成功率。 在胚挽救中，成熟的幼胚的萌发率高，因此，采集蒴果时，尽量待其顶部微黄时采收，采收后将种子进行一段时间的预培养，使种皮褐化易于剥落也是有必要的。剥胚培养中，添加光照有利于胚的萌发；胚培养基中添加适量的GA3有利于胚的快速萌发和伸长。 种间杂交是培育百合新品种的重要手段。西伯利亚和黄天霸都是目前市场上非常畅销的商业