水稻穗颈伸长基因eui2的克隆及生物信息学分析-biopublisher.docVIP

研究论文 Research Article 水稻环氧化物酶基因(OsEH1)的克隆及在原核真核中的表达与分析 汪社亮1 3，柳参奎2 ，玉光惠3，巩鹏涛3 ，赵德刚1 ，方宣钧3 贵州大学生命科学院, 贵州省农业生物工程重点实验室, 贵阳, 550025, 中国 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040, 中国 海南省农作物分子育种重点实验室, 海南省热带农业资源开发利用研究所, 三亚, 572025, 中国 通讯作者及电子邮箱: xuanjunfang@; 作者电子邮箱 基因组学与应用生物学，2010年，第20卷，第1期 DOI: 收稿日期：2010年7月28日 接受日期：2010年8月15日 发表日期：2010年9月10日 这是一篇开放阅取的论文，其论文发布和传播接受《Creative Commons Attribution License》所有条款,。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三者无条件的使用、传播以及任何媒介的复制或再制作。 本文首次发表在Rice Genomics and Genetics开放取阅期刊上。本文是依据《Creative Commons Attribution License》协议，用中文再次发表与传播，如果读者对中文含义有歧义的话，请以英文原文为准。如果任何人要引用本研究内容，建议的引用格式如下：Wang et al., Studies on rice epoxide hydrolase, gene cloning and expressing in ecoli, yeast and Aarabidopsis, Rice Genomics and Genetic, Vol 1 No.4 (Doi:10.5376.rgg. 2010.01.0004) 摘 要 环氧化物酶(Epoxide hydrolase)，亦称环氧化物水合酶(Epoxide hydratase)，在植物、昆虫、真菌、细菌、酵母、哺乳动物等各种生物中普遍存在。环氧化物酶通过在环醚上加入一个水分子将环氧化物转化成反式二氢二醇化合物，起着多样化的生物学功能。基于水稻基因组序列和环氧化物酶氨基酸序列的保守性，借助全基因组扫描技术已知在水稻基因组中存在不少于10个的环氧化物酶类似蛋白，然而，关于水稻环氧化物酶的基因结构、表达特性以及生物学功能研究甚少。本研究利用反转录PCR从水稻日本晴中克隆该基因，获得一个933 bp的ORF，编码311个氨基酸序列，获得的ORF定位于水稻第十染色体上，BAC注释为一个含有4个内含子分开的5个外显子的mRNA序列转录链。我们将这个基因命名为OsEH1(Oryza sativa Epoxide Hydrolase1, 水稻环氧化物酶基因1)。构建了原核表达重组质粒，命名为pQE-30-OSEH1，应用热激法将其转入蛋白表达菌株E.coli M15中，诱导表达，蛋白大小约为36KDa。构建了酵母表达pYES2-OSEH1-GFP质粒，确定OSEH1编码蛋白在真核细胞中主要分布于细胞质中。构建了植物表达质粒pBI121-OSEH1质粒，电转化法将其转入农杆菌EHA105中，PCR鉴定获得转OSEH1基因的农杆菌，转化拟南芥获得kana抗性及PCR检测阳性的转OSEH1基因拟南芥。水稻中的Western bloting 分析表明，在日本晴幼苗期，OSEH1蛋白水平在叶子中表达比较显著，而在鞘和根中几乎难以检测出表达信号。 关键词 粳稻(Oryza sativa L spp. japonica )；环氧化合物；环氧化物水解酶；OsEH1基因；大肠杆菌表达，酵母表达；拟南芥转化 Studies on Rice Epoxide HydrolaseGene Cloning and Expressing in E. coli, Yeast and Arabidopsis Sheliang Wang 13 Liu Shenkui 2 Guanhui Yu3 Pengtao Gong3 Degang Zhao1 Xuanjun Fang 4 Guizhou Key Lab of Agro-Bioengineering, Guizhou University, Guiyang, 550025, China Alkali Soil Natural Environmental Science Center (ASNESC), Northeast Forestry University, Harbin, 150040,China Hainan Key Lab of Crop Molecular Breeding, Hainan Institute of Tropical Agricu