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鹅细小病毒的分子生物学研究进展蒋运博，董浩，马磊，徐楠楠，段小波，胡桂学关键词:鹅细小病毒; 分子生物学; 小鹅瘟摘要:鹅细小病毒( GPV) 病是危害养鹅业的主要传染病之一。文章根据国内外对鹅细小病毒的分类地位、分子生物学特性、基因组的结构特点、非结构蛋白与结构蛋白的功能以及分子生物学诊断与防治等方面的研究作一综述，以期为鹅细小病毒及小鹅瘟的防控提供参考。小鹅瘟是由鹅细小病毒( goose parvovirus，GPV)引起的雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性败血性传染病。该病主要侵害3 ～20 日龄的雏鹅和雏番鸭，以渗出性肠炎、小肠黏膜表层大面积坏死脱落、肠道栓塞为特征性病变，是一种主要侵害肠、肝脏、肾脏、心脏等实质脏器的急性、高度接触性传染病。1956 年，小鹅瘟病毒首次由中国学者方定一在江苏扬州市发现并分离，是一类无囊膜的 DNA 病毒。1974 年，国际禽病学会( WPSA) 将其命名为Derzsys氏病。近年来，许多国内外学者从不同角度，对鹅细小病毒进行了分子水平上的研究，更好地认识了鹅细小病毒的生物学特性，促进了对该病的有效防制，文章仅对鹅细小病毒分子生物学方面的研究进展作一综述。1 分类地位及一般特性鹅细小病毒属于细小病毒科细小病毒亚科细小病毒属成员，国际病毒分类委员会将细小病毒科分为2 个亚科，即细小病毒亚科和浓核病毒亚科，细小病毒亚科又分为细小病毒属、红病毒属和依赖病毒属。小鹅瘟病毒即鹅细小病毒属于单链线状 DNA 病毒，外观呈圆形或六角形，是一种无囊膜的 20 面体对称病毒，直径为 20 ～25 nm。该病毒只有 1 个血清型，与本属其他成员无交叉免疫反应，但区别于本属其他成员的一个显著特点是，迄今尚未发现其有凝集红细胞的性能。研究表明，该病毒能凝集黄牛的精子［1 －2］。鹅细小病毒对外界因素的抵抗力很强，对乙醚、氯仿、胰酶的处理有抵抗力，对紫外线敏感，56 ℃加热1 h，病毒仍能使鹅胚死亡，在50 ℃条件下经3 h或37 ℃条件下经7 d 对感染效价无影响。鹅细小病毒初代分离，只能应用鹅胚和番鸭胚，是自主性细小病毒，无需辅助病毒便可自行复制，复制过程在细胞核内完成，并形成大型包涵体［3］。鹅细小病毒体外培养具有很强的专一性，除可在鹅胚组织细胞内增殖外，在猪肾上皮、小鼠胎儿成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞、兔肾上皮细胞、PK －15 细胞、鸭胚的成纤维细胞、肝细胞及睾丸细胞中均未见增殖。2 分子生物学特性2． 1 基因组结构特征小鹅瘟病毒基因组全长 5 106 nt，病毒粒子为正链 DNA 或负链 DNA，两者的数目基本相等［4］。基因组包括左右2 个开放阅读框［5］，间隔18 个碱基，两端含有末端倒置重复序列( ITR) ; 左侧的 ORF 编码非结构蛋白，即NS1 和NS2，产生于病毒复制的早期，也称ReP蛋白; 右侧的 ORF 编码 3 种结构蛋白，即VP1、VP2、VP3，编码 3 种结构蛋白的核苷酸数目分别为 2 199 nt、1 764 nt和1 605 nt，其中 VP2 和 VP3为主要的结构蛋白，VP3 是主要的衣壳蛋白，约占总蛋白的80%。VP1 和 VP3 的起始密码子为2 个比较常见的 AUG，VP2 基因是以不典型的起始密码子ACG 起始的，而鹅细小病毒的所有毒株都是以 ACG起始的，具有高度的保守性。2． 2 复制机理鹅细小病毒的基因组含有发夹结构，其复制是以3端发夹结构的 3 － OH 为引物合成基因组的互补链，形成复制型( RF) 分子，切断亲代链以切口处的3 － OH 为引物，延伸被中断的亲代链，此时 3端发生了倒置重排; 在拓扑异构酶的作用下，线性双链分子发生重分异构化，使每条链的两端均形成发夹结构;以一条链的 3端发夹结构为引物，另一条链为模板合成一个新的 RF 分子; 同时形成基因组 DNA，RF 分子进入新一轮的 DNA 复制。新合成的基因组即可以作为模板复制新的子代基因组，也可被包装进入衣壳形成子代病毒粒子。2． 3 蛋白及功能VP1 基因全长为 2 199 nt，起始密码子位于2 439 nt处。VP1 蛋白多肽由 732 个氨基酸组成，含有 VP2、VP3 的全部氨基酸序列，VP1、VP2、VP3 具有相同的羧基端。VP1 可协助病毒或 DNA 通过核孔转运至细胞核内，还可与宿主细胞的特殊受体结合，使病毒粒子进行有效感染［6］。VP2 和 VP3 蛋白是主要的结构蛋白，起始密码子分别位于 2 874 nt和3 303 nt处。VP2 是主要免疫功能区，具有免疫原性，能刺激机体产生抗体，其起始密码是 ACG，终止密码是 TAA，基因大小为 1 764 nt。VP3 基因全长1 605 nt，编码 534 个氨基酸，具有高度的保守性。有学者对鹅细小病毒氨基酸序列进行配对分