第九章 原生质体培养和体细胞杂交.pptVIP

第九章 原生质体培养与体细胞杂交;原生质体的获得;原生质体的概念;原生质体的用途;原生质体的用途;原生质体的分离 ——机械法;原生质体的分离 ——机械法;原生质体的分离 ——酶解法;具体步骤：;材料的选择 材料来源：细胞分裂旺盛的外植体，如幼嫩小苗的根、胚轴、子叶、幼叶等；处于快速生长期的愈伤组织或悬浮细胞. 对于容易培养、再生那里较强的双子叶植物（如烟草、菊花、胡萝卜、矮牵牛等）也可用完全展开的叶片作材料. 用于分离原生质体的植物材料要培养在最佳的光温条件下. ;酶解处理 酶解处理对以后的原生质体培养至关重要.原则：利用尽可能低的酶浓度和尽可能短的酶解时间来获得大量有活力的原生质体. 酶解液的准备：由于植物细胞壁的主要成分是纤维素、半纤维素和果胶质组成的，所以，酶解液中一般含有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶，浓度为0.5-2.0%;渗透压的调节 必要性：为了保持释放出来的原生质体的活力和膜稳定性，必须使原生质体处于一个等渗环境中。因此，酶解液中必须加入渗透压调节剂。 常用的渗透压调节剂有：葡萄糖、甘露醇和山梨醇等，浓度一般为0.35-0.8mol/L。具体用什么浓度，要根据材料的水势来确定。 ;加入其它物质 酶解液中加入较高浓度的Ca2+可以提高膜的稳定性； 加入葡聚糖硫酸钾、KH2PO4也可以提高原生质体的稳定性和活力； 加入牛血清蛋白可防止酶解过程对细胞膜和细胞器的破坏； 在酶解液中加入pH缓冲剂有利于保持酶解液的酸碱环境的稳定，增加原生质体的释放量和原生质体的稳定性。 ;原生质体的分离 ——酶解法;原生质体的分离 ——酶解法;原生质体的分离 ——酶解法;叶片的酶解法分离原生质体;原生质体的收集与纯化 过滤：酶解结束后，要及时的将酶解物通过孔径为20-80μm的不锈钢筛网过滤，除去未被酶解的组织块和细胞团。 离心：滤液转到离心管中在50×g下离心5min。 反复洗涤：离心结束后，弃去上清液，用培养基和原生质体洗液重新悬浮沉淀的原生质体，再离心。如此反???2-4次，就可以将残留的酶液去掉。 纯化：如原生质体不纯（如含有较多的细胞碎片），可用含高浓度（21%）蔗糖的培养基进行离心、纯化，完整的原生质体漂浮在上清液的上部。;完整的原生质体;原生质体的分离 ——酶解法;原生质体的分离 ——酶解法;原生质体培养;苜蓿;适边捞捐远煤湍抡吮攻楞臀坪传撵衙劳钾嚎扣钟便哥猴废久于整讨抄礁公第九章 原生质体培养和体细胞杂交第九章 原生质体培养和体细胞杂交;;夜来香;;原生质体的培养方法;原生质体的培养方法;原生质体的培养方法;原生质体的培养方法;;看护培养;原生质体的生长、分裂;影响原生质体培养效果的因素;培养基;培养基;培养基;体细胞杂交