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超声辅助酶解法提取马齿苋总生物碱 摘要：超声辅助纤维素酶提取马齿苋中总生物碱，正交试验研究超声辅助纤维素酶提取50℃，100minH=5，酶为3mg/g马齿苋生物碱的提取率为0.3624%。 关键词：马齿苋生物碱提取紫外分光光度法 马齿苋是马齿苋科一年生肉质草本植物，民间俗名长命菜瓜子菜安乐草等。全草均可入药，是药食同源的植物，作为传统中药草，早在明朝李时珍《本草纲目》就对它有详细介绍近年来研究表明，马齿苋不仅有抗心血管疾病[]和抗氧化[]的功效，而且具有很高的抗癌作用[]，许多生物碱是抗癌的有效成分[]，有文献记载马齿苋含有生物碱[]。白冰等[8]研究发现马齿苋降糖作用与马齿苋中的生物碱类和多糖类组分的α-葡萄糖苷酶抑制活性有关，并阐明了马齿苋降血糖作用的机制。目前，荷兰、英国和法国等西欧国家已人工繁育出马齿苋蔬菜专业品种，美国已开发出多种马齿苋保健食品[9]。马齿苋生物碱的成分复杂，据文献报道主要是以酰胺类结构为主[10]，因此，对于马齿苋生物碱的提取主要集中于总生物碱的提取。 马齿苋中总生物碱的提取工艺有乙醇提取[11]和超声波法[10]。超声波法作为正在发展的新兴技术，与传统提取工艺相比，具有快速、高效、节能等优点，该法是利用超声波增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高溶出速度和溶出次数，缩短提取时间的浸提方法本马齿苋生物碱进行研究。 1 实验部分 仪器：Agilent8451紫外分光光度计美国Agilent材料及：纤维素酶（30units/mg 1.2标准溶液的配置 配成咖啡因醇溶液，质量浓度为1.0mg/ml溴甲酚氯缓冲溶液[]；称量溴甲酚氯125mg ，用浓度为0.2mol/LNaH溶液12.50ml溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2.55g，加少量蒸馏水溶解后，转移至250ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度摇匀。用H计校正使H=4.42。 1.3生物碱的提取分离和测定 将十月份采摘的马齿苋全草洗净晒干粉碎呈粉末状。准确称取5g马齿苋干草，加入适量的纤维素酶，取50ml已调好酸度的盐酸水溶液置于超声波仪器中提取， 对提取液用浓氨水调pH=9-10，石油醚萃取3次，合并萃取液蒸干石油醚，得生物碱固体。 1.3.2马齿苋生物碱的测定 将生物碱精制品乙醇定容10ml，用刻度移液管准确移取1ml至10ml容量瓶中，分别加入溴甲酚氯缓冲溶液和2ml无水乙醇溶液用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后用试剂空白为参比，于波长620nm处测定其吸光度。 .3.3马齿苋生物碱提取率的计算 将提取液测得的吸光度代入标准曲线方程可计算出生物碱含量C（mg/ml）则生物碱提取率为： 1.4标准曲线的绘制 用刻度移液管准确移取咖啡因乙醇溶液于0ml0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml于0，1，2，3，4，5，6号10ml容量瓶中再分别加入1ml溴甲酚氯缓冲夜和2ml无水乙醇溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，用0号容量瓶中溶液为空白参比，于620nm处测定1，2，3，4，5，6号容量瓶试剂的吸光度，得到直线方程A= 11.0969C-0.11252R2=0.99978。经过线性回归处理得到咖啡因的标准曲线（如图1） 图1咖啡因标准曲线 2 实验结果与讨论 2.1单因素实验 因超声波仪器的最大超声功率为400W超声频率45Hz，条件均较温和不会破坏生物碱的结构，本实验均在400W45kHz条件下结合其他条件提取。 2.1.1酶解温度对生物碱提取的影响 称取1.0g马齿苋5份分别置于5个平底烧瓶中，各加入纤维素酶3mg及50ml水，分别置于温度为40、45、50、、60超声波清洗容器中，超声酶解100min，趁热抽滤各提取液，冷却后测吸光度，得到酶解温度对生物碱提取率的影响关系图（如图2）。 图2 酶解温度对生物碱提取率的影响2.1.2时间对生物碱提取的影响 称取1.0g马齿苋5份分别置于5个平底烧瓶中，各加入纤维素酶3mg50ml pH=5的盐酸溶液，在50超声环境中提取，分别提取30min、、60min、90min、120min、150min，趁热抽滤各提取液，冷却后测吸光度，得到时间对生物碱提取率的影响关系图（如图） 图时间对生物碱提取率的影响 酶解pH对生物碱提取的影响 称取1.0g马齿苋5份分别置于5个平底烧瓶中，各加入纤维素酶3mg，再分别加入pH为4、5、6、7、8的盐酸水溶液50ml，在50的超声环境中提取100min，趁热抽滤各提取液，冷却后测吸光度，得到pH对生物碱提取率的影响关系图如 图pH对生物碱提取率的影响 2.1.4酶用量对生物碱提取的影响 称取1.0g马齿苋5份分别置于5个平底烧瓶中，分别加入纤维素酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg，再分别加入50ml盐酸溶液，在50的超声环境中提取100min