油脂及油炸食品中BHA、BHT、TBHQ及PG四种抗氧化剂检测.docVIP

油脂及油炸食品中BHA、BHT、TBHQ及PG四种抗氧化剂检测摘要：油脂及油炸食品在运输和储存过程中,易与空气中的氧气发生反应,使产品氧化而变味、变质。为了防止油脂氧化,常需要在这类食品中添加抗氧化剂，如丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)和没食子酸丙酯（PG）就是四种油脂类食品中常用的抗氧化剂，但是这类抗氧化剂往往是具有一定的毒副作用，如何快速有效对这四种抗氧化剂进行同时检测显得十分重要，试验证明采用二元梯度洗脱的高效液相色谱法对其检出效果较好。 关键词：抗氧化剂 液相色谱检测 pH值控制 波长选择 引言： 抗氧化剂通常用于油脂和油炸食品中，阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长食品贮存期的一种食品添加剂。抗氧化剂按来源分为天然抗氧化剂和人工合成抗氧化剂，油脂和油炸食品中常用的抗氧化剂包括丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)和没食子酸丙酯（PG）,这类抗氧化剂对人体有一定的毒害作用, 有害于人们的身心健康，GB 2760《食品添加剂使用标准》中严格规定了这类抗氧化剂的使用范围和使用量。我国先后制订了多个关于抗氧化剂的检测标准，规定了相关的相测方法和条件，本方法采用二元梯度洗脱的高效液相色谱法，通过多次实验验证，更适合对油脂及油炸食品中四种抗氧化剂的同时检测。 一、检测仪器和步骤 1、仪器设备和试剂 仪器试备：液相检测采用的是戴安高效液相色谱仪，配合紫外线检测器和四元梯度输液泵；检测仪器还包括蒸发仪、离心机和过滤器等。 试剂：乙酸水溶液（利用超纯水加优级纯冰乙酸进行制备，pH3.0，0.45μm水系滤膜处理）；甲醇（HPLC级别，0.45μm有机系滤膜进行处理）；丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、叔丁基对苯二酚、没食子酸丙酯的标准溶液（称取四种抗氧化剂各50mg，分别用甲醇定容到50mL，制备后的标准溶液相当于BHA、BHT、TBHQ和PG的1mg/mL溶液）。 2、检测条件 色谱柱设置：VP-ODS250mm×4.6，C18,10μm；流动相设置：A液设置为pH3.0乙酸溶液，B液设置为甲醇溶液；泵流速度为1.0mL/min；检测采用280nm波长；试剂进样量20μL；二元体梯度洗脱设置：为0-4分钟，30%B液；4-10分钟，63%B液；10-16分钟，90%B液；16-25分钟，30%B液。 3、样品处理 油脂类样品：称取样品5g（精确至0.01g），置于10mL离心管中并加入5mL甲醇，摇动2min，并进行冷却，以2000r/min离心5min，将处理后的上清液置于100mL圆底烧瓶中，残留夜继续用5mL甲醇提取，反复3次，合并上清液。在40℃水浴中进行蒸发处理，去除甲醇，剩余液体为3-4mL即可，随后移入10mL离心管，用少量甲醇冲洗烧瓶，并将洗涤液置入离心管，甲醇定容到刻度，随后离心5min，并提取上清液用0.45μm滤膜处理，供液相色谱检测。 油炸类样品：根据油脂含量，称取样品50-100g（精确至0.01g），加入50mL的石油醚（沸程30-60）+乙醚，比例为40:10，振动提取30min，完成后利用滤纸过滤，置入250mL的圆底烧瓶中，然后利用相同的石油醚（沸程30-60）+乙醚进行冲洗，合并滤液后进行水浴蒸发，回收残留脂肪，称取样品5g（精确至0.01g），同油脂类样品操作。 二、检测过程与结果分析 1、检测最佳分离条件 从流动相和比例的选择上看，检测分别采用的是甲醇/乙酸溶液(pH3.0)，以及乙腈/磷酸钠缓冲液为流动相进行了对比。从试验的结果看，乙腈/磷酸钠缓冲液对BHA、BHT和PG的检出效果较好，但是TBHQ的分离效果差，同时乙腈的毒性更高，且磷酸钠缓冲液的制备较复杂，在色谱柱中容易沉淀影响检测系管路畅通，影响泵送效果，所以没有采用此种溶剂进行试验。 在试验中利用甲醇/乙酸(pH3.0)为液体流动相，并采用不同比例进行测试。试验的结果表明，四种测试对象的极性顺序为PG、TBHQ、BHA和BHT。甲醇/超纯水的比例为65/35的环境中流动相极性大，而BHT没有峰值，90/10时各组分存留时间短，且分离效果差；75/25、80/20、85/15的情况下BHA、BHT的分离效果较好，但是PG、TBHQ存留时间短，无法有效分离。因此在测试中选择甲醇/乙酸(pH3.0)水溶液进行二液梯度处理的方式，可以使得检测对象25分钟内分离完全效果最佳。 图：空白加标样品色谱图（1．PG 2．TBHQ 3．BHA 4．BHT） 2、pH值对峰值干扰 在测试中PG极性大且拖尾情况严重，加入冰乙酸后得到了一定的改进。在100mL超纯水的流动相中加入冰