第二章 预处理和固液分离技术.pptVIP

第二章 预处理及固液分离技术 ;主要内容;预处理的目的 改变发酵液的物理性质，改善流体性能，提高过滤速率。 使目的产物转相便于后处理（多数是液相）。 去除发酵液中的部分杂质，便于后续操作。;通过微生物发酵或动植物培养得到的原料液应首先将其中的菌体或细胞与培养液分离。 如果目标产物为胞外代谢物则直接对培养液进行分离纯化； 如果目标产物为胞内代谢产物，要对细胞进行处理，释放目标产物，然后除去细胞碎片，再进行目标物质的纯化。;一、预处理特性的改变方法 取决于可分离物质的性质，主要考虑目的物质的分子大小、热稳定性、pH的适应性。 加热：最简单最经济的预处理方法（常用） 加热能使液体粘度降低，过滤速度加快。 该方法只适合于对热较稳定的生化物质，加热的温度和时间须严加选择。 ;调pH 改变发酵液的胶体状态 使产物转入液相 使杂质（蛋白、多糖、Ca2+等）发生沉淀。 一般用草酸或无机酸、碱来调节。 通常加热和调pH协同作用。 链霉素生产发酵液预处理时，采用调pH＝3.0左右，加热至70℃，维持半小时以凝固蛋白质，这样可使过滤速度增大10～100倍，滤液粘度降低为原先的1/6。; 加入某些反应剂，某些物质或杂质能转为助滤剂，可消除这些物质对过滤的影响，从而提高速率。 正确选择能提高3-10倍速率; 助滤剂是一种具有特殊性能的细粉或纤维，它能使某些难于过滤的物料变得容易过滤。 ? 硅藻土和珍珠岩是两种最常用的助滤剂。硅藻土是几百年前的水生植物沉淀下来的遗骸，珍珠岩是处理过的膨胀火山岩。;二、去除杂质的具体方法;蛋白质的性质和变性机理 1）沉淀法：酸性溶液与碱性溶液 2）变性法：加热、调pH、酒精、丙酮、表面活性剂 3）吸附法：有色物质 常用的是离子交换剂、离子交换纤维、活性碳等材料的吸附法。 如：强碱性阴离子交换剂用于酪蛋白酶或果胶酶的脱色。 阴离子交换树脂用于谷氨酸发酵液脱色。;三、凝聚和絮凝; 通常发酵液中细胞或菌体带负电荷，由于静电引力的作用将溶液中带相反电性的粒子（即正离子）吸附在周围，在界面上形成了双电层。 反离子化合价越高，即凝聚能力越强。 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：Al3+Fe3+Ca2+Mg2+K+Na+Li+。 常用的凝聚剂有：Al2(S04)3 ·18H20(明矾)；AlCl3·6H20； FeCl3；ZnS04；MgC03等 ;2）絮凝作用是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶粒形成较大絮凝团的过程。 絮凝剂必须具有长链线状的结构，易溶于水，在长的链节上含有相当多的活性功能团。 絮凝剂的功能团强烈地吸附在胶粒的表面上。一个高分子聚合物的许多功能基团分别吸附在不同颗粒的表面上，因而产生架桥联接。;絮凝剂包括各种天然聚合物和人工合成聚合物。;第四节 细胞破碎; 定义: 细胞破碎就是采用一定的方法，在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜，设法使胞内产物最大程度地释放到液相中，破碎后的细胞浆液经固液分离除去细胞碎片后，再采用不同的分离手段进一步纯化.;一、细胞壁的组成和结构;二、细胞破碎效果的检查;三、细胞破碎技术;高压匀浆器 影响匀浆破碎的主要因素是压力、温度和通过匀浆器阀的次数。 高压匀浆法的适用范围较广，在微生物细胞和植物细胞的大规模处理中常采用。;高速珠磨机（high spced bead mill）研磨是常用的一种方法，它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝等研磨剂一起快速搅拌，使细胞获得破碎。 在工业规模的破碎中常采用高速珠磨机。 ;超声波破碎器 超声波处理细胞悬浮液时，破碎作用受许多因素的影响，通常声强和振幅影响很大，但强度太高易使蛋白质变性，频率的变化影响不明显：此外介质的离子强度、pH值、菌体的种类和浓度也有很大的影响。;超声波振荡过程中遇到的最大问题就是产生的热量不容易驱散，所以影响了它在大规模工业上的应用，但在实验室和小规模生产中是一种很好的方法。;非机械法 非机械方法很多，包括酶解、渗透压冲击、冻结和融化、干燥法和化学法溶胞等。 酶解法 是利用酶反应，分解破坏细胞壁上特殊的键，从而达到破碎目的。酶解法可以在细胞悬浮液中加入特定的酶，也可以采用自溶作用。 酶解法的优点是发生酶解的条件温和、能选择性地释放产物、胞内核酸等泄出量少、细胞外形较完整、便于后步分离等；但酶水解价格高，故小规模应用较广。;渗透压冲击法 冻融法 干燥法 化学法:采用化学法处理可以溶解细胞或抽提胞内组分。常用酸、碱、表面活性剂和有机溶剂等化学试剂。;选择破碎方法的依据 (1)细胞的处理量 (2)细胞壁