脂多糖联合α干扰素抑制体外白血病细胞株U937增殖及凋亡效应探究.docVIP

脂多糖联合α干扰素抑制体外白血病细胞株U937增殖及凋亡效应探究【摘要】 目的 实验观察α干扰素(IFNα)和/或脂多糖(LPS)对体外白血病细胞株U937的增殖及凋亡效应。方法 MTT法检测IFNα和/或LPS对U937细胞增殖效应的影响；同时采用流式细胞仪对U937细胞的凋亡率的影响。结果 等剂量合用IFNα和LPS后对U937细胞的增殖率和凋亡率均有明显的升高作用(P005),具有统计学意义。结论 IFNα和LPS联用后对白血病细胞株U937的增殖抑制率及凋亡率有明显增强作用。 【关键词】 脂多糖；α干扰素；U937细胞；增殖；凋亡 作者单位：510800 南方医科大学附属花都医院肿瘤科 α干扰素(IFNα)能够显著抑制肿瘤细胞的增殖，能够增加NK细胞和其他一些活性免疫细胞功能，有较强的抗肿瘤活性，其发挥抗肿瘤作用的机制是通过直接抑制肿瘤细胞的增殖与分化，目前IFNα在临床上已被广泛用于血液系统肿瘤的治疗［1］。Toll样受体为介导天然免疫反应并触发或桥接适应性免疫的模式识别的一类受体，这类受体在U937细胞中表达。作为Toll样受体的主要外源性配体之一的内毒素脂多糖(LPS)，可与Toll样受体结合后通过信号转导的级联效应产生抑制U937的增殖［2］。本文旨在研究LPS在体外是否具有增强IFNα抑制白血病细胞株U937细胞增殖效应和机制。为TLR配体或其激动剂协同佐剂IFNα免疫治疗白血病提供理论依据。 1 材料与方法 11 材料 胎牛血清(FBS)(天津市灏洋生物制品科技责任有限公司，批号：100413)；二甲亚砜(DMSO)溶液、四甲基偶氮唑蓝(MTT)(北京SABC公司产品)；EL301型酶标仪(美国BioTek公司)；人白血病细胞株U937细胞自购进后复苏使用。 12 方法 121 U937细胞增殖抑制率的测定 人白血病细胞株U937细胞常规离心弃上清复苏，复苏后的细胞在加热灭活的10%FBS及100 μg/ml链霉素、100 Μ/ml青霉素的RPMI1640的培养基中，置于37℃、湿度饱和及5%的CO2孵箱中培养，平均每3天对培养基进行更换并传代一次。依据处理U937细胞的药物不同对实验进行分组，实验组：A组(单用IFNα 01 μg/ml)、B组(单用LPS 01 μg/ml)，C组(两药等剂量合用)；另设空白对照组。经药物处理后的U937细胞，混匀后，移取100 μl至96孔培养板中，细胞浓度约为5×105 ml，每组重复8孔，最终每孔体积为02 ml。置37℃、湿度饱和及5%的CO2孵箱中培养；培养液3 d更换一次。于培养终止前4 h每孔中加入20 μL MTT(5 mg/ml)，4 h后离心(3 000 rpm?min，5 min)，将上清弃去，然后每孔加入DMSO 150 μL以终止培养。使用酶联免疫检测仪测定其吸光度，以此计算细胞增殖抑制率〔细胞增殖抑制率(%)=(l实验组吸光度/对照组吸光度)×100%〕。 122 U937细胞凋亡率的检测 100 μL人白血病细胞株U937细胞置于含10%FBS的RPMI1640培养基中培养过夜，细胞密度调节至5×106/ml，Binding缓冲液洗涤一次，另取100 μL Binding缓冲液重悬，移取5 μL AnnexinVFITC加入，置暗处孵育20 min，移取10 μL浓度为1 mg/ml的AnnexinV/碘化丙锭，室温下暗处孵育20 min，Binding缓冲液洗涤后重悬，立即检测，获取参数并进行数据分析。 13 统计学方法 所有数据录入Excel中初步处理后，采用SPSS 170统计学软件包进行数据处理，计量资料以均值±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验，以P005表示差异有统计学意义。 2 结果 各组给予不同药物与U937细胞作用2 d后，与对照组比较，各实验组的抑制率(%)和凋亡率(%)均显著升高(P005)；实验组组内比较，两药等剂量合用较单用的抑制率(%)和凋亡率(%)亦均显著升高(P005)。见表1。 表1 IFNα和/或LPS对U937细胞增值的抑制率和 细胞凋亡率的影响(x±s) 组别 抑制率(%) 凋亡率(%) A组 041±005* 036±003* 实验组 B组 033±001* 030±002* C组 072±006*# 063±005*# 对照组 006±002 007±004 注：*与对照组比，各实验组均有统计学意义(P005)；#C组分别比较A、B组有统计学意义(P005) 3 讨论 急性白血病的发生和发展比较复杂，具有多阶段